粗吻海龙抗肿瘤活性蛋白的制备方法

摘要

一种医药技术领域的粗吻海龙抗肿瘤活性蛋白的制备方法，步骤为：(1)以粗吻海龙为原料，粉碎后过筛；(2)在粗吻海龙粗粉中加入4～12倍量的乙醇－水溶液，制取海龙蛋白粗提液；(3)将蛋白粗提液减压蒸发浓缩后，与大孔树脂接触，制取海龙蛋白分离液；(4)将海龙蛋白分离液减压蒸发浓缩，加入硫酸铵粉末，将沉淀用Tris－HCl缓冲液溶解，得到海龙粗蛋白；(5)将海龙粗蛋白用Tris－HCl缓冲液溶解后，与凝胶过滤介质接触，获得海龙抗肿瘤粗蛋白；(6)将海龙抗肿瘤粗蛋白用Tris－HCl缓冲液溶解，与离子交换介质接触，梯度NaCl缓冲液洗脱获得。本发明制得的粗吻海龙抗肿瘤活性蛋白，纯度高，经检测具有抗肿瘤活性，同时有增强免疫的作用。

主权项

1、一种粗吻海龙抗肿瘤活性蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以粗吻海龙为原料，粉碎后过筛，待用；(2)在粗吻海龙粗粉中加入4～12倍量的乙醇-水溶液，匀浆、低温浸泡，离心后取上清液，即为海龙蛋白粗提液；(3)将蛋白粗提液减压蒸发浓缩后，与大孔树脂接触，充分吸附后依次用蒸馏水洗脱，收集蛋白组分，得到海龙蛋白分离液；(4)将海龙蛋白分离液减压蒸发浓缩，加入硫酸铵粉末，充分搅拌后4℃静置，离心，收集沉淀，将沉淀用少量Tris-HCl缓冲液溶解后透析、浓缩、冷冻干燥，即得到海龙粗蛋白；(5)将海龙粗蛋白用Tris-HCl缓冲液溶解后，与凝胶过滤介质接触，用Tris-HCl缓冲液洗脱，收集分子量在10-100kDa的蛋白质洗脱液，透析、浓缩、冷冻干燥后，经体外抗肿瘤活性检测，获得海龙抗肿瘤粗蛋白，蛋白质成分含量达95-100％；(6)将海龙抗肿瘤粗蛋白用Tris-HCl缓冲液溶解，与离子交换介质接触，梯度NaCl缓冲液洗脱，得到数个不同浓度NaCl缓冲液的洗脱组分，第四个洗脱峰经透析、浓缩、冻干后即为海龙抗肿瘤活性蛋白，获得蛋白质含量在99--100％之间，糖含量在0-1％之间的白色粉末。