主权项 |
1、一种籼稻的离体培养方法,其步骤包括:1)将去壳的成熟种子、幼胚或花药的籼稻外植体,置于75%酒精中清洗1分钟,0.15%升汞浸泡10-15分钟,无菌水漂洗,接入MS+2,4-D 2.5mg/L+谷氨酰胺300mg/L+脯氨酸500mg/L+3%蔗糖+0.3%植物胶(Phytagel)的培养基上,该培养基的pH为5.9,培养条件为26±1℃,暗培养,将所述的外植体诱导出愈伤组织;2)将步骤1)所得到的愈伤组织接入继代培养基培养,该培养基的组分为:KNO3 1900-2000mg/L,NH4NO3 1500-1650mg/L,KH2PO4 150-170mg/L,MgSO4·7H2O 350-370mg/L,CaCl2·2H2O 350-400mg/L,FeSO4·7H2O 35-42mg/L,Na2EDTA 50-56mg/L,MnSO4·4H2O 80-100mg/L,ZnSO4·7H2O 15-25mg/L,H3BO3 25-30mg/L,KI 6.0-8.0mg/L,CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L,Na2MoO4·2H2O2.0-3.0mg/L,CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L,甘氨酸2.0-3.0mg/L,VB1 0.5-1.0mg/L,VB6 1.0-1.5mg/L,烟酸1.0-1.5mg/L,肌醇100-150mg/L,谷氨酰胺300-500mg/L,脯氨酸500-800mg/L,2,4-D 2.0-3.0mg/L,麦芽糖30g/L,植物胶3.0g/L,pH为5.9,培养条件为26±1℃,暗培养,每隔20天继代一次;3)取步骤2)所得到的继代愈伤组织接入分化培养基,该培养基的组分如下:KNO3 2800-3000mg/L,(NH4)2SO4 350-450mg/L,KH2PO4 300-400mg/L,MgSO4·7H2O 180-200mg/L,CaCl2·2H2O 170-200mg/L,FeSO4·7H2O 45-55mg/L,60-74mg/L Na2EDTA,MnSO4·4H2O 80-100mg/L,ZnSO4·7H2O 15-25mg/L,H3BO3 25-30mg/L,KI 6.0-8.0mg/L,CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L,Na2MoO4·2H2O2.0-3.0mg/L,CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L,甘氨酸2.0-3.0mg/L,VB1 0.5-1.0mg/L,VB6 1.0-1.5mg/L,烟酸1.0-1.5mg/L,肌醇100-150mg/L,谷氨酰胺300-500mg/L,脯氨酸500-800mg/L,麦芽糖30-50g/L,6-苄基氨基嘌呤2mg/L,激动素2mg/L,吲哚乙酸0.2mg/L,萘乙酸0.2mg/L,植物胶5g/L,pH为6.0,培养条件为26±1℃,光照培养(16小时光/8小时暗),再生出植株。 |