发明名称 新颖的骨矿化作用蛋白质、DNA、载体、表现系统
摘要 本发明针对编码有LIM矿化作用蛋白质或LMP之分离的核酸分子。本发明进一步提供内含编码有LMP核酸序列的载体,以及含有此载体的宿主细胞。此外,本发明有关藉由使用一包含编码有LIM矿化作用蛋白质的核酸序列之分离的核酸分子,穿染骨原先趋细胞以诱发骨骼形成的方法。该穿染可在活体外或活体内藉由直接注入病毒或裸出的质体DNA而发生。于一特别的实施例中,本发明提供了一种结合脊柱的方法,其以含有具一编码有LIM矿化作用蛋白质的核酸核序列之分离的核酸分子来穿染骨原先驱细胞,混合该等经穿染骨原先驱细胞及一基质并使该基质接触脊柱。最后,本发明有关一以本发明的载体稳固的穿染宿主细胞用于诱发骨骼形成的方法。
申请公布号 TWI244503 申请公布日期 2005.12.01
申请号 TW087119193 申请日期 1998.11.19
申请人 .艾莫里大学 发明人 葛雷.海儿;史考特.伯登
分类号 C12N15/12;C07K14/51;A61K48/00 主分类号 C12N15/12
代理机构 代理人 恽轶群 台北市松山区南京东路3段248号7楼;陈文郎 台北市松山区南京东路3段248号7楼
主权项 1.一种载体,其包含有一分离的核酸分子,该分离的 核酸分子包含一个编码有人类LIM矿化作用蛋白质( LMP)的核酸序列,其中该核酸分子在包含5X SSPE的 溶液,42℃之培养标准条件下会杂交至一个互补于 完整长度之序列编号第25号(tcctcatccg ggtcttgcat gaactcggtg)的核酸分子,或该分子在一探针与其标的 序列实质相同的情况时,可令一探针杂交至其标的 序列之高度严苛条件下,会杂交至一个互补于完整 长度之序列编号第26号(gcccccgccc gctgacagcg ccccgcaa)的 核酸分子,且其中该分子包括有显示于序列编号第 25号及序列编号第26号中的核酸序列。 2.如申请专利范围第1项之载体,其中该分离的核酸 分子包含有序列辨识编号第33号 序列辨识编号第33号 3.如申请专利范围第1项之载体,其中该分离的核酸 分子包含有序列辨识编号第22号 序列辨识编号第22号 4.一种载体,其包含有一分离的核酸分子,该分离的 核酸分子包含一个编码有褐家鼠LMP蛋白质之核 酸序列,其中该经分离的核酸分子于包含5X SSPE的 溶液,42℃之培养标准条件下会杂交至一个互补于 完整长度之序列辨识编号第2号的核酸分子 序列辨识编号第2号 5.一种宿主细胞,其包含有如申请专利范围第1至4 项中任一项的载体,其中该宿主细胞系择自于由原 核生物细胞、酵母细胞及哺乳动物细胞构成的群 组中。 6.一种单株抗体,其对于一个由一分离的核酸分子 所编码的人类LIM矿化作用蛋白质有专一性,其中该 核酸分子系于包含5X SSPE的溶液,42℃之培养标准条 件下会杂交至一个互补于完整长度之序列辨识编 号第25号(tcctcatccg ggtcttgcat gaactcggtg)的核酸分子,或 者该分子系在一探针与其标的序列实质相同的情 况时,可令一探针杂交至其标的序列之高度严苛条 件下,会杂交至一个互补于完整长度序列之辨识编 号第26号(gcccccgccc gctgacagcg ccccgcaa)的核酸分子。 7.如申请专利范围第6项之单株抗体,其中该人类LIM 矿化作用蛋白质系为如序列辨识编号第10号之HLMP- 1 序列辨识编号第10号 8.如申请专利范围第6项之单株抗体,其中该人类LIM 矿化作用蛋白质系为如序列辨识编号第34号之HLMP- 1s 序列辨识编号第34号 9.一种多株抗体,其对于一个由一分离的核酸分子 所编码的人类LIM矿化作用蛋白质具专一性,其中该 核酸分子系于包含5X SSPE的溶液,42℃之培养标准条 件下会杂交至一个互补于完整长度之序列辨识编 号第25号(tcctcatccg ggtcttgcat gaactcggtg)的核酸分子,或 该分子系在一探针与其标的序列实质相同的情况 时,可令一探针杂交至其标的序列之高度严苛条件 下,会杂交至一个互补于完整长度序列之辨识编号 第26号(gcccccgccc gctgacagcg ccccgcaa)的核酸分子。 10.如申请专利范围第9项之多株抗体,其中该人类 LIM矿化作用蛋白质系为如申请专利范围第7项中所 述之序列辨识编号第10号之HLMP-1。 11.如申请专利范围第9项之多株抗体,其中该人类 LIM矿化作用蛋白质系为如申请专利范围第8项中所 述之序列辨识编号第34号之HLMP-1s。 12.一种单株抗体,其对于一个褐家鼠LIM矿化作用蛋 白质具有专一性,该蛋白质系序列辨识编号第1号 序列辨识编号第1号: 13.一种多株抗体,其对于如申请专利范围第12项之 序列辨识编号第1号中所述褐家鼠LIM矿化作用蛋白 质具有专一性。 14.一种内含一编码有LIM矿化作用蛋白质的核酸序 列之分离的核酸分子于制造一供用于穿染进入骨 原先趋细胞以诱发骨骼生成之组成物的用途。 15.如申请专利范围第14项之用途,其中该分离的核 酸分子位于一个载体中。 16.如申请专利范围第15项之用途,其中该载体为一 个表现载体。 17.如申请专利范围第16项之用途,其中该载体为一 个质体。 18.如申请专利范围第16项之用途,其中该载体为一 个病毒。 19.如申请专利范围第18项之用途,其中该载体为一 个腺病毒。 20.如申请专利范围第18项之用途,其中该载体为一 个反转录病毒。 21.如申请专利范围第14项之用途,其中该等骨原先 趋细胞于活体外被穿染之。 22.如申请专利范围第14项之用途,其中该等骨原先 趋细胞藉由该分离的核酸分子的直接注入而于活 体内被穿染之。 23.如申请专利范围第14项之用途,其中该LIM矿化作 用蛋白质系为如申请专利范围第7项中所述之序列 辨识编号第10号之HLMP-1。 24.如申请专利范围第14项之用途,其中该LIM矿化作 用蛋白质系为如申请专利范围第8项中所述之序列 辨识编号第34号之HLMP-1s。 25.如申请专利范围第14项之用途,其中该LIM矿化作 用蛋白质系为如申请专利范围第12项中所述之序 列辨识编号第1号之RLMP。 26.一种制造用以接合脊柱之制品的方法,其包含有 : (a)以一个包含一编码有LIM矿化作用蛋白质的核 酸序列之分离的核酸分子来穿染骨原先趋细胞;并 且 (b)混合该等经穿染的骨原先趋细胞与一基质; 其中该编码有LIM矿化作用蛋白质之核酸序列的 表现于该基质中引起矿化骨骼的形成。 27.如申请专利范围第26项之方法,其中该等骨原先 趋细胞于活体外被穿染之。 28.如申请专利范围第26项之方法,其中该LIM矿化作 用蛋白质为选自于如申请专利范围第7项中所述之 序列辨识编号第10号之HLMP-1、如申请专利范围第8 项中所述之序列辨识编号第34号之HLMP-1s,及如申请 专利范围第12项中所述之序列辨识编号第1号之RLMP 所组成之群组中。 29.一种内含编码有LIM矿化作用蛋白质的核酸序 列之分离的核酸分子于制造一供用于穿染进入骨 原先驱细胞中以藉由过度表现该分离的核酸分子 以刺激骨原可溶性因子产生之用途。 30.一种可杂交至编码有LIM矿化作用蛋白质之核酸 的反讯息寡核酸于制造一供用于穿染进入LIM矿 化作用蛋白质被表现的细胞中以抑制该矿化作用 表现之组成物的用途。 31.如申请专利范围第30项之用途,其中该反讯息核 酸具有列示于序列辨识编号第35号(gcactacctt gaaggaatcc atggt)的核酸序列。 32.如申请专利范围第22项之方法,其中该分离的核 酸分子位于一个选自于由质体及病毒所构成之群 组中的载体。 33.如申请专利范围第32项之方法,其中该载体为质 体,该质体被直接地注入至肌肉组织内。
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