中性粒细胞抗原底片的制备方法

摘要

本发明涉及抗中性粒细胞胞浆抗体检测用中性粒细胞抗原底片的制备方法，是将肝素抗凝血沉降红细胞、保留白细胞血浆层后，应用Ficoll－Hypaque梯度剂分离中性粒细胞，加入NaCl溶液制成细胞悬液，直接滴于载波片上制备中性粒细胞抗原底片。本发明制备的中性粒细胞抗原底片检出率明显高于国产抗原底片，与进口试剂检测结果没有差异，且抗原底片细胞呈单层均匀分布，形态饱满，胞浆成分展示充分，结果易于观察，可以满足临床需求。

主权项

1、一种中性粒细胞抗原底片的制备方法，其特征是包括如下步骤：取正常人新鲜肝素抗凝血，与1％甲基纤维素溶液按照4∶1的体积比混合，室温下沉降红细胞，保留白细胞血浆层；相同温度下，在试管中将等体积的Ficoll-Hypaque梯度剂I轻轻叠加在Ficoll-Hypaque梯度剂II上；将白细胞血浆层轻轻叠加在梯度剂的上层，平衡后置于水平式离心机内，1800～2000rpm/min离心20～25分钟；吸取中间中性粒细胞层，加入4℃预冷的缓冲液，1000～1200rpm/min离心5～10分钟，弃上清；细胞沉淀中加入4℃预冷的0.1％～0.85％NaCl溶液，并调整中性粒细胞数至5×105/ml；细胞悬液加入清洁载波片上自然风干，4℃下无水乙醇固定5分钟，风干后密封。