重组chBJS<SUP>TWO</SUP>蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种重组chBJS^TWO蛋白的制备方法。RT-PCR扩增的不同品系鸡BJS^TWO的cDNA片段与原核表达载体pBAD/His B、真核表达载体pMETαA和真核表达载体pMETA构建表达质粒pBAD/His B/chBJS^TWO、pMETαA/chBJS^TWO和pMETA/chBJS^TWO，分别转化大肠杆菌LMG194、酵母菌株PMAD11和PMAD16后诱导表达。大肠杆菌和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJS^TWO粗制品，PMAD11表达的chBJS^TWO主要以分泌形式存在于培养基中，经过离心取上清即可得到chBJS^TWO粗制品。用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可以较快的得到chBJS^TWO纯品，粗制品或纯品可以作为免疫佐剂、抗病添加剂和疾病治疗药物。本发明具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。

主权项

1.一种重组chBJSTWO蛋白的制备方法，其特征在于它的步骤如下：1)自中国的仙居鸡、丝羽乌骨鸡和外来品种艾维茵肉鸡的脾淋巴细胞中克隆出chBJSTWO的cDNA与含有PBAD启动子的原核表达载体pBAD/His B组建成表达载体pBAD/His B/chBJSTWO；或者上述chBJSTWO cDNA与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETαA组建成分泌型表达载体pMETαA/chBJSTWO；或者上述chBJSTWO cDNA与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETA组建成胞内表达型表达载体pMET A/ chBJSTWO，将重组表达载体pBAD/His B/chBJSTWO转化入LMG194宿主菌，将重组表达载体pMETαA/chBJSTWO转化入PMAD11酵母工程菌，将重组表达载体pMET A/ chBJSTWO转化入PMAD16酵母工程菌；2)用RM作为基础培养基，通过发酵扩增大肠杆菌工程菌LMG194；3)用BMDY作为基础培养基，通过发酵扩增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表达不同时间加氮源、碳源等营养素；4)大肠杆菌LMG194和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品，PMAD11表达的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培养基中，经过离心取上清即可得到chBJSTWO粗制品；用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可得到chBJSTWO纯品；5)粗制品或纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂后，无菌过滤、分装和冻干后制成成品，保存于-20℃的冷藏环境中。