RNA序列扩增的方法和组合物

摘要

本发明提供了等温扩增RNA的方法。这些方法尤其适用于扩增样品中多种RNA样本。这些方法使用复合引物、第二引物和链置换以产生多拷贝的包含与目的RNA序列具互补序列的DNA产物。另一方面，这些方法使用了单引物(其为复合引物)和链置换来产生多拷贝的包含与目的RNA序列具互补序列的DNA产物。在一些实施方案中，包括转录步骤以产生目的RNA序列的多拷贝正义RNA。这些方法用于制备核酸文库和基片来分析生物样品中细胞的基因表达。本发明还提供了用于实践这些扩增方法的组合物和试剂盒，并提供了使用扩增产物的方法。

主权项

1.产生多拷贝的与目的RNA序列互补的多核苷酸序列的方法，所述方法包括下列步骤：(a)用RNA依赖的DNA聚合酶延伸与靶RNA杂交的第一引物，其中第一引物为包含RNA部分和3’DNA部分的复合引物，由此产生包含第一引物延伸产物和靶RNA的复合体；(b)用从RNA/DNA杂合体上切割RNA的酶切割步骤(a)复合体中的RNA；(c)用DNA依赖的DNA聚合酶延伸与第一引物延伸产物杂交的第二引物，由此产生第二引物延伸产物，以形成第一和第二引物延伸产物复合体；(d)用从RNA/DNA杂合体上切割RNA的酶从第一和第二引物延伸产物复合体的复合引物上切割RNA，以使复合引物与第二引物延伸产物杂交，其中复合引物包含RNA部分和3’DNA部分；(e)用DNA依赖的DNA聚合酶延伸与第二引物延伸产物杂交的复合引物；由此所述第一引物延伸产物被置换，且由此产生多拷贝的与目的RNA序列互补的多核苷酸序列。