主权项 |
1.获得转质体基因组的拟南芥或芸苔植株的方法,其包括:a)在高植物生长激素的培养基中培养来自拟南芥或芸苔植株的拟南芥或芸苔植株细胞,以刺激均一细胞分裂;b)将所述植物细胞转至琼脂固化培养基上的滤纸上;c)将转化DNA分子传递到所述植物细胞的质体基因组中,所述转化DNA分子含有:i)包含来自待转化质体基因组的质体DNA序列的多个寻靶区段,所述寻靶区段有助于所述转化DNA同源重组进入所述质体基因组;ii)来自质体DNA的5’端和3’端调控序列,它操作性地连接到所述寻靶区段中的选择性标记基因上,所述调控序列有助于选择性标记基因的表达和所编码mRNA的稳定,所述选择性标记基因在植物细胞中赋予对选择性试剂的抗性;iii)来自质体DNA的5’端和3’端调控序列,它操作性地与包含外源目的基因的编码序列连接,从而有助于外源目的基因的表达及所编码mRNA的稳定;和iv)用于将所述外源基因邻近所述选择性标记基因插入的至少一个克隆位点,所述插入不干扰所述选择性表型的赋予及质体侧翼基因的功能;d)将在步骤(c)中转化的细胞以高密度转至琼脂固化的高细胞激动素培养基上培养预定的时间,所述培养基含有可促进植株再生的试剂;e)将按步骤(d)处理的细胞转至含所述再生促进试剂和选择性试剂的琼脂固化培养基中,所述转化细胞通过所述选择性标记基因的表达被赋予对所述选择性试剂的抗性;并且f)选择具有转化的质体基因组的细胞并从中诱导植株再生。 |