用于重组腺伴随病毒生产的全功能辅助病毒的产生及其用途

摘要

本发明包括了一种装载了2型腺伴随病毒(AAV-2)rep-cap基因的重组单纯疱疹病毒(HSV1-rc)的产生方法及其在重组腺伴随病毒(rAAV)生产中的用途。这种重组单纯疱疹病毒能提供rAAV质粒在细胞内复制和包装成rAAV毒粒所需的全部辅助功能，并能用于rAAV的大量制备。HSV1-rc的产生是在对一套含有HSV1病毒全基因组的粘性质粒(Set C粘粒，包括cos6，cos14，cos28，cos48，cos56)进行改造的基础上实现的。首先，用重组DNA技术将AAV-2rep-cap基因插入其中一个粘粒的HSV-1基因组中，例如插入cos6的HSV1 UL2基因中构建成cos6-rcΔUL2；插入cos56的HSV1 UL44基因中构建成cos56-rcΔUL44。然后，将插入了rep-cap的重组粘粒与相应的其余4个粘粒经酶切切去粘粒骨架部分后用脂质体方法共转染HSV1敏感细胞如BHK-21，5个HSV1片段在细胞中发生同源重组而产生HSV1-rc。用HSV1-rc感染rAAV载体质粒转染的细胞或稳定携带rAAV载体质粒的细胞株，就能产生大量有感染性的rAAV毒粒。用这种方法产生的rAAV能将外源基因导入哺乳动物细胞中并表达。

主权项

1.基因组中携带有2型AAV病毒的rep-cap基因序列的重组人1型单纯疱疹病毒HSV1-rc。