天然活性蛋白质和肽的分离纯化方法

摘要

天然活性蛋白质和肽的分离纯化方法，其特点是将富含蛋白质的天然原料，经脱脂、清洗并进行匀浆，称取匀浆后的原料100重量份和去离子水100～250重量份加入到生化反应器中，调节pH＝5～8，升温70～90℃，保温搅拌10～30分钟，然后迅速降温至30～50℃，加入复合蛋白酶0.02～0.5重量份，搅拌均匀后，进行酶解反应，获得蛋白质和肽的混合物，采用经OMEGA技术处理的聚醚砜超低蛋白质吸附膜和切向流超滤技术，将其按分子量的大小进行分级后，再通过离子交换色谱分离模式纯化，即阴离子交换柱，磷酸盐缓冲系统，色谱柱的平衡、上样、淋洗、洗脱等工序，获得不同分子量和不同分子结构的纯天然活性蛋白和肽。

主权项

1、天然活性蛋白质和肽的分离纯化方法，其特征在于：(1)将富含蛋白质的天然原料，经脱脂、清洗并进行匀浆，称取匀浆后的原料100重量份和去离子水100～250重量份加入到生化反应器中，调节pH＝5～8，升温70～90℃，保温搅拌10～30分钟，然后迅速降温至30～50℃，加入复合蛋白酶0.0～0.5重量份，搅拌均匀后，进行酶解反应，获得蛋白质和肽的混合物，采用经OMEGA技术处理的聚醚砜超低蛋白质吸附膜和切向流超滤技术，将其按分子量的大小进行分级后，再进行离子交换色谱模式的分离纯化；(2)采用离子交换色谱分离模式，其分离纯化的条件： 色谱柱：阴离子交换柱，有效孔径10～30nm； 流动相：A：0.001～0.5摩尔/升磷酸盐缓冲液(pH＝6.0～8.0)， B：0.1～1.0摩尔/升NaCl(pH＝6.0～8.0)； 流速：50～100毫升/分； 梯度：经10～30分钟流动相由0.001～0.5摩尔/升磷酸盐缓冲液(pH＝ 6.0～8.0)到0.1～1.0摩尔/升NaCl(pH＝6.0～8.0)； 柱温：20～25℃； 进样量：50～100毫升； 紫外检测：260nm。(3)离子交换色谱的操作步骤如下：a.色谱柱的平衡：0.001～0.5摩尔/升磷酸盐缓冲液(pH＝6.0～8.0)，冲洗至基线 平稳；b.上样：50～100毫升；c.淋洗：0.001～0.5摩尔/升磷酸盐缓冲液(pH＝6.0～8.0)，淋洗至基线平稳；d.洗脱：0.1～1.0摩尔/升NaCl(pH＝6.0～8.0)，线性梯度洗脱，并收集相应的馏分；e.清洗：分别用0.5M NaOH和1.5M NaCl进行清洗和再生色谱柱；(4)将所收集到的各馏分，经过透析、分别冷冻保存。