脱水河豚毒素的提取方法

摘要

本发明是一种提取脱水河豚毒素的方法，所用原料为纯化河豚毒素的母液，经高压液相色谱分离，再经离子交换树脂、生物凝胶脱盐回收得到的脱水河豚毒素结晶。用此方法精制的脱水河豚毒素中，不含有河豚毒素。脱水河豚毒素是快速可逆的钠离子通道阻断剂，可广泛应用于神经生物学和生理学及其他科学研究。目前国际上无此产品。

主权项

1、一种提取脱水河豚毒素的方法，其特征在于：按下列步骤提取：(1)纯化河豚毒素母液制备：先将粗品河豚毒素加5-20％醋酸溶解，加无水乙醇1-10倍，离心除去不溶物，然后将上清液移到小烧杯，贮藏在密闭的容器中，并另放一杯乙醚，控制温度5-35℃、12-72小时，最后将醇醚溶液经离心分离出河豚毒素母液，母液经浓缩，加氨水调节PH7-10，收集其沉淀物；(2)高压液相色谱分离提取脱水河豚毒素：将上述沉淀物，用1-30％磷酸溶解，用流动相组成含有0.1-10％甲醇的0.01-0.2M磷酸盐缓冲液，调PH为5.7，流动相流速1-20ml/min，用示差检测器进行检测，分离过程按记录仪上出峰图，收集脱水河豚毒素馏份；(3)脱水河豚毒素馏份的脱盐、回收：选用填料为酸性阳离子交换树脂和生物凝胶，洗脱剂用1-20％的醋酸，收集PH4-7馏份，加氨水调节PH7.5-10，可沉淀出脱水河豚毒素，经反复分离提取和脱盐，可得到纯品脱水河豚毒素结晶。