| 摘要 |
"DETECçãO DE áCIDOS NUCLEICOS POR EXTINçãO FLUORESCENTE". Um oligonucleotídeo detector tendo uma seq³ência que forma uma estrutura secundária com bases intramolecularmente dispostas em pares é descrito para uso na detecção de seq³ências alvos de ácidos nucleicos e na amplificação da seq³ência alvo. O oligonucleotídeo detector é adicionalmente modificado por ligação a dois corantes que formam um par de corantes doador/receptor. Os dois corantes são posicionados sobre o oligonucleotídeo detector de modo tal que eles estejam em proximidade estreita espacial na estrutura secundária com bases dispostas em pares, dobradas, desse modo causando uma extinção da florescência do doador. O oligonucleotídeos detector pode, opcionalmente, compreender ainda um sítio de identificação de endonuclease de restrição (RERS), o qual permanece parcial ou inteiramente de fita única na estrutura secundária com bases dispostas em pares. O RERS é flanqueados pelos dois corantes. Na presença do alvo, a estrutura secundária com bases dispostas em pares é desdobrada ou linearizada, aumentando a distância entre os corantes doador e receptor e causando uma alteração na fluorescência do doador e/ou do receptor. Se um RERS estiver presente, ele é tornado de fita dupla na presença do alvo, permitindo a clivagem ou o corte por uma endonuclease de restrição e a separação dos dois corantes em fragmentos separados de ácido nucleico. Isto pode adicionalmente contribuir para a magnitude da alteração na fluorescência.
|
