从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法

摘要

本发明适用于蛋白纯化技术领域，提供了一种从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法。该方法包括下述步骤：取血浆，使用阴离子交换柱对其进行第一次层析纯化处理，获得PA‑RBP复合物初体；使用疏水柱对所述PA‑RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理，得到纯化后的PA‑RBP复合物；将所述纯化后的PA‑RBP复合物进行解离处理，得到含有PA和RBP的混合样品；使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理，分离得到PA和RBP。

主权项

一种从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，包括下述步骤：取血浆，使用阴离子交换柱对其进行第一次层析纯化处理，获得PA‑RBP复合物初体，所述阴离子交换柱采用UNOsphere Q填料的阴离子交换层析柱，其中，所述第一次层析纯化处理的洗脱体系采用Tris‑HCl浓度为20mM、NaCl浓度为500mM、且PH9.0的洗脱液；使用疏水柱对所述PA‑RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理，得到纯化后的PA‑RBP复合物，所述疏水柱采用Phenyl sepharose FF/HS填料的疏水层析柱，其中，所述第二次层析纯化处理的洗脱体系采用Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄浓度为50mM、(NH₄)₂SO₄浓度为0.5M、且PH6.0的洗脱液；将所述纯化后的PA‑RBP复合物进行解离处理，得到含有PA和RBP的混合样品；使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理，分离得到PA和RBP，所述疏水柱采用Phenyl sepharose FF/HS填料的疏水层析柱，其中，所述第三次层析纯化处理分别先后采用下述洗脱液A和洗脱液B作为洗脱体系，洗脱液A：Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄浓度为50mM、(NH₄)₂SO₄浓度为0.5M、且PH6.0；洗脱液B：Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄浓度为50mM、且PH6.0；所述第二次层析纯化处理、所述第三次层析纯化处理的层析流速为1.5‑3ml/min。