一种口腔咽拭子细菌宏基因组DNA提取方法

摘要

本发明提供一种口腔咽拭子细菌宏基因组DNA提取方法，包括口腔咽拭子的前处理、细菌裂解、DNA的分离和杂蛋白的去除，硅胶膜纯化柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱这五个步骤提取口腔咽拭子细菌基因组DNA。本发明特殊的样本处理方式，可以大大提高得率。同时，使用超声波破碎裂解结合酶裂解，利用恰当的破壁时间和温和的条件，使革兰氏阴性菌和阳性菌及其他细菌适当破壁，又能使基因组DNA不受过强的物理因素导致断裂。本发明仅用1.5 h就可以提取口腔咽拭子细菌宏基因组DNA，且细菌宏基因组得率更高。

主权项

一种口腔咽拭子细菌宏基因组DNA提取方法，其特征在于：所述方法包括如下：（1） 用超声波细胞破碎仪对口腔咽拭子及其保存液中的细菌进行初步裂解；（2）向拭子样品中加入裂解液和酶液进行裂解；（3）向步骤（2）的样品中加入酚‑氯仿‑异戊醇混合液，震荡离心取上清液； (4)将上述步骤（3）中的上清液中加入等体积的氯仿‑异戊醇混合液混匀，离心取上清液；（5）向步骤（4）的上清液中加入乙醇；（6）将上述步骤（5）的上清液移入硅胶膜纯化柱，离心弃滤过液；（7）在上述步骤（6）的硅胶膜纯化柱中加入去蛋白液，离心弃滤过液；（8）在上述步骤（7）的硅胶膜纯化柱中加入漂洗液，离心弃滤过液；（9）用洗脱液将上述步骤（8）硅胶膜上的DNA洗脱下来。