EDF重组蛋白的表达方法

摘要

本发明涉及一种EDF重组蛋白的表达方法，属于获得肽的基因工程方法技术领域。对中华大蟾蜍EDF‑1的ORF进行密码子优化和化学合成，并连接到原核表达载体，获得重组质粒；将其转化至大肠杆菌感受态细胞中，涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上倒置培养；次日，取一单菌落接种于LB培养液恒温振荡培养；将培养的菌液接种于新鲜LB培养液，恒温震荡培养，向其中加入IPTG，培养并进行重组蛋白的诱导表达。将发明应用于EDF‑1的表达和纯化、抗血清制备等，具有表达量大、纯度高等优点。

主权项

EDF重组蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）中华大蟾蜍EDF‑1 ORF密码子优化及其原核表达重组质粒的构建：对中华大蟾蜍EDF‑1的ORF进行密码子优化和化学合成，并连接到原核表达载体pET‑28b (+)，获得重组质粒pET‑28b‑EDF‑Bufo；（2）重组蛋白的诱导表达：①将重组质粒pET‑28b‑EDF‑Bufo转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中，涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上，37℃倒置培养12‑15h；②次日，取一单菌落接种于l mL LB培养液，37℃恒温振荡培养12～15h；③将过夜培养的菌液按l％的体积接种于新鲜的LB培养液，在37℃下恒温震荡培养至OD值介于0.7‑1.0时，向其中加入IPTG，培养并进行重组蛋白的诱导表达。