细胞拉曼静默区表面增强拉曼散射基底及其制备方法和应用

摘要

本发明属于生物大分子分离分析技术领域，具体为—种金为核的细胞“拉曼静默区”的表面增强拉曼散射基底及其制备方法和在细胞拉曼成像的应用。本发明首先通过水热法合成50‑60nm的金纳米粒子，并溶于缓冲溶液，然后加入“拉曼静默区”分子（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇，在溶液中轻微团聚，最后将多巴胺加入缓冲溶液中，通过多巴胺自聚合产生的醌基将多肽序列连接在金球表面，制备得对肿瘤细胞的细胞核成像的表面增强拉曼散射基底。将该材料用于细胞拉曼成像，速度快，效率高，操作简单，具有巨大的临床应用潜力。

主权项

一种金为核的细胞“拉曼静默区”表面增强拉曼散射基底的制备方法，其特征在于，具体步骤为：（1）（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇的合成：在通有氩气的条件下，向三口烧瓶中加入2‑3 g、9‑10 mM的碘苯，1‑2 g、8‑10 mM的4乙炔基苯甲醛， 500‑600 mg、0.2‑0.3mM四三苯基膦钯，以及80‑100 mL无水三乙胺，然后鼓入氩气排除装置内氧气，并将其放在油浴中加热至沸腾，并持续加热反应8‑10 h；反应结束后将溶剂旋干，得到中间产物4‑苯乙炔基苯甲醛；然后将400‑500 mg、7‑8 mM的上述中间产物，400‑500 mg、7‑8 mM的巯基乙胺，400‑500 mg、3‑5 mM干燥的无水硫酸镁，以及15‑20 mL无水四氢呋喃，置于三口烧瓶中，在常温下搅拌反应5‑6 h；反应结束后将反应液旋干除去、洗涤，即得到（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇；（2）利用水热法合成50‑60 nm 金纳米粒子：向三口烧瓶中移取1‑2 mL、10 mg/mL的高氯金酸溶液以及95‑98 mL 的去离子水，混合均匀后，放入油浴中加热，控制每2‑3s回流一次，向其中加入500‑800uL、1‑3 %的柠檬酸三钠，保持回流20‑30min；冷却至室温，即得到金纳米粒子溶液；（3）拉曼探针分子的修饰：取步骤（2）中合成的50‑60 nm金纳米粒子溶液，以8000‑10000 rpm转速进行离心5‑10 min，吸取上层清液，重溶在缓冲溶液中，向其中加入 5‑10 uL步骤（1）合成的（E）‑2‑((4‑(苯乙炔基)亚苄基)氨基)乙硫醇，混合均匀，然后将其放于酶解仪中，维持反应1‑2 min，实现拉曼探针分子的修饰；（4）细胞核标记物的修饰，即采用醌基共价偶联的方法将细胞核标记物修饰在金纳米粒子的表面：向上述步骤（3）的溶液中加入10‑20 uL、10‑20 ug/mL的细胞核标记多肽序列，在酶解仪中反映24‑28 h，即得到目标物金为核的细胞“拉曼静默区”的表面增强拉曼散射基底。