可产生三维立体图像的光学显微成像方法

摘要

可产生三维立体图像的光学显微成像方法，涉及光学显微成像方法。提供一种可产生衬度高、立体感强、细微结构表现丰富、边界清楚的三维立体图像的光学显微成像方法。镜头选择；样品制备；样品聚焦；衬度调节。或镜头选择；样品制备；样品聚焦；挡光片放置；衬度调节。基本原理：利用单一光源在被观察样品周围制造环形照明光，收集样品暗场光的同时收集少量明场光，通过调节照明或收集方式调节样品暗场光在收集光中的比例，可使被观察的样品形成衬度高、立体感强、细微结构表现丰富、边界清楚的三维立体图像。

主权项

可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于包括以下步骤：(1)镜头选择：根据待观察的样品选取合适的物镜以及比此物镜NA值小的聚光镜，所述聚光镜需能产生环形照明光，将选取好的镜头分别安装在显微镜的物镜转盘和聚光镜平台上；所述聚光镜为暗场聚光镜，或为普通聚光镜搭配挡光片；(2)样品制备：将样品固定在载物台上；(3)样品聚焦：打开显微镜，利用单一光源通过聚光镜在样品周围制造环形照明光，先调节聚光镜，将光斑聚焦到样品上，再调节物镜，使其聚焦到样品上；(4)衬度调节：通过微调聚光镜在样品上的聚焦深度，或通过调节孔径光阑及挡光片的尺寸，或选择NA值差别不同的物镜及聚光镜组合，或使用空间光调制器，可调节样品暗场光在收集光中的比例，实现衬度调节，可使被观察的样品形成衬度高、立体感强、细微结构表现丰富、边界清楚的三维立体图像。