一种基于不对称膜的人体黑素细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种基于不对称膜的人体黑素细胞的培养方法，本发明利用组织工程技术构建具有良好生物相容性的不对称膜，进行了黑素细胞或其与成纤维细胞、角质形成细胞的（共）培养和转移，适用于色素脱失症（如白癜风）和皮肤颜色的调节。本发明涉及不对称膜的制备、细胞‑不对称膜复合材料的构建。由于膜材料中引入不对称结构，促进了细胞培养及活性的保持。

主权项

一种基于不对称膜的黑素细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备不对称的生物膜材料：将一种或两种生物相容性材料按1:50‑50:1的重量比例混合后，配成质量浓度为1‑10％的水溶液；将水溶液注入细胞培养板，鼓风条件下于30‑70℃下烘0.1‑5小时，使溶液表面水分挥发，形成1‑10微米的致密膜；然后加入氢氧化钠‑碳酸钠水溶液，浸泡24小时，使致密膜下层溶液发生相分离，形成多孔结构，所述氢氧化钠‑碳酸钠水溶液中，氢氧化钠和碳酸钠的总质量与水的质量配比为1‑10:90‑99混合组成，且氢氧化钠与碳酸钠的质量配比为1:3‑3:1；用去离子水清洗至溶液pH为中性，‑60～‑40℃冷冻干燥8‑24小时，得到不对称膜；然后用交联剂对不对称膜在20‑50℃交联处理0.5‑24小时，交联处理后用纯净水冲洗除净残留的交联剂，再在鼓风条件下于30‑120℃下烘2‑48小时；(2)构建细胞‑不对称膜复合材料：不对称膜用于接种细胞前，用体积浓度为75％的酒精浸泡12小时，随后再用PBS洗净残留酒精，并置于紫外灯下照射3‑24小时；完成消毒灭菌后，在细胞培养板里注入细胞培养液，置于细胞培养箱中于37℃、体积浓度为5％的CO₂、饱和湿度条件进行孵化；将按1‑40:0‑200:0‑100的细胞个数比例共培养的黑素细胞、成纤维细胞和角质形成细胞以5×10³‑5×10⁵个细胞/cm²的密度接种在孵化过的不对称膜上，同时加入1‑10毫升的细胞培养液，置于细胞培养箱于37℃、体积浓度为5％的CO₂、饱和湿度条件下培养，每两天更换一次细胞培养液，培养时间为1‑10天，即获得细胞‑不对称膜的复合材料。