基于CRISPR/Cas9技术将非糯性水稻株系改造成糯性株系的打靶载体和方法

摘要

本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9技术将非糯性水稻株系改造成糯性株系的打靶载体，其特征在于，包含sgRNA表达框和Cas9表达框，以及筛选标记，其中所述sgRNA表达框包含第一启动子以及由所述第一启动子控制转录的所述sgRNA编码序列，所述Cas9表达框包含第二启动子以及由所述第二启动子控制转录的Cas9编码序列；所述第一启动子和所述第二启动子为在水稻中组成型表达的相同或不同的强启动子；所述sgRNA编码序列由位于上游的位点靶向RNA的编码序列和位于下游的招募Cas9的RNA的编码序列组成，所述位点靶向RNA的编码序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了使用所述打靶载体将非糯性水稻株系改造成糯性水稻株系的方法。通过本发明，可简便并且有效实现该技术目的，并且大大节约了时间。

主权项

一种基于CRISPR/Cas9技术将非糯性水稻株系改造成糯性株系的打靶载体，其特征在于，包含sgRNA表达框和Cas9表达框，以及筛选标记，其中所述sgRNA表达框包含第一启动子以及由所述第一启动子控制转录的sgRNA编码序列，所述Cas9表达框包含第二启动子以及由所述第二启动子控制转录的Cas9编码序列；所述第一启动子和所述第二启动子为在水稻中组成型表达的相同或不同的强启动子；所述sgRNA编码序列由位于上游的位点靶向RNA的编码序列和位于下游的招募Cas9的RNA的编码序列组成，所述位点靶向RNA的编码序列如SEQ ID NO:1所示。