一种国槐离体叶片体细胞胚诱导的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种国槐离体叶片体细胞胚诱导的快速繁殖方法，步骤如下选取国槐嫩枝消毒后，取带有腋芽或顶芽的茎段，接入芽启动培养基上，诱导顶芽和腋芽萌发；将诱导出的新梢去掉基部叶片，切成含腋芽或顶芽的茎段接种在试管苗增殖培养基上，获得无菌试管苗；取无菌试管苗的叶片接种在体胚诱导培养基上培养形成愈伤组织；将上述愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上，培养形成丛生芽小苗；将丛生芽小苗切成愈伤块转接到试管苗增殖培养基或不定芽诱导培养基上进行培养；将培养的丛生芽转入壮苗培养基中，进行壮苗培养后即可炼苗移栽。本发明方法，再生率高、出芽多，植株移栽成活率可达到95％以上，种苗生长健壮，不但可有效解决优良种苗种质退化问题。

主权项

一种国槐离体叶片体细胞胚诱导的快速繁殖方法，其特征是：包括以下步骤：(1)将国槐茎消毒后，取带有芽的茎段，接入芽启动培养基上，诱导顶芽和腋芽萌发，所述芽启动培养基为：MS+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；(2)将诱导出的新梢去掉基部叶片，切成含芽的茎段接种在试管苗增殖培养基上培养，获得无菌试管苗，所述试管苗增殖培养基为：MS+1.0～2.0mg/L BA+1.0～2.0mg/LIBA+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；(3)取无菌试管苗的叶片接种在体胚诱导培养基上培养形成愈伤组织，所述体胚诱导培养基为：MS+3.0～5.0mg/L 2，4‑D+0.5～1.0mg/L BA+0.5～1.0mg/L NAA+0.1～0.5mg/LTDZ+0.5～1.0mg/L谷氨酰胺+0.5～1.0mg/L CH+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；(4)将上述愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上，培养形成丛生芽小苗，所述不定芽诱导培养基为：MS+0.1～0.5mg/L BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～1.0mg/L谷氨酰胺+0.5～1.0mg/L CH+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；(5)将丛生芽小苗切成愈伤块转接到试管苗增殖培养基或不定芽诱导培养基上进行增殖快繁培养；(6)将增殖培养的丛生芽从基部切开，转入壮苗培养基中，进行壮苗培养，所述壮苗培养基为：MS+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；(7)将壮苗培养后的小苗切成单株转接到生根培养基上培养后，即可炼苗移栽，所述生根培养基为：1/2MS+0.1～0.5mg/L IBA+0～0.05mg/L NAA+5.0g/L琼脂+20g/L蔗糖，pH值5.8～6.0，所述1/2MS是MS全量减半。