一种百合X病毒半定量检测金标卡及制备方法

摘要

一种百合X病毒半定量检测金标卡及制备方法，为了提高胶体金免疫层析检测方法的使用效率和田间普及率，实现对百合病毒的快速且半定量检测，将检测线增加至三条，再将已知量的有浓度差异的抗体分别包被于检测线，研制能快速半定量检测LVX的金标卡，满足百合大规模脱毒及田间对百合病毒快速半定量检测的需求；所述金标卡检测针对性强，操作简便，准确性高，灵敏性强，无需借助任何仪器和设备，就可以准确检测样品之间病毒含量的差异。

主权项

一种百合X病毒半定量检测金标卡，其特征在于包括金标卡槽（1）、衬板（12）、样品垫（8）、胶体金结合垫（9）、硝酸纤维素膜（10）和吸水滤纸（11），其中金标卡槽（1）包括上壳体和下壳体，上壳体和下壳体通过卡扣连接，上壳体设有加样孔（2）和反应窗（3），样品垫（8）置于加样孔（2）下方，硝酸纤维素膜（10）置于反应窗（3）下方，胶体金结合垫（9）上含有金标探针，衬板（12）固定于金标卡槽（1）中，样品垫（8）、胶体金结合垫（9）、硝酸纤维素膜（10）和吸水滤纸（11）依次排列连接于衬板（12）上表面，硝酸纤维素膜（10）上设有第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）和对照线（7），第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）上分别包被的是不同浓度的兔抗LVX IgG，对照线（7）上包被的是羊抗兔IgG，第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）上LVX IgG包被量分别为1.0～1.5 pg、0.5～0.75 μg 和1.0～1.5 μg蛋白，金标探针抗体标记量为16μg/mL，羊抗兔IgG包被量为2.0～2.5μg蛋白；用所述金标卡检测时，在所述加样孔（2）处加入百合样品的待检溶液，对比反应窗（3）内第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）和对照线（7）的颜色，即可判定被检测百合是否感染了百合X病毒；将待检溶液加入到金标卡的加样孔内，若待检溶液中含有LVX，检测样品经过所述胶体金结合垫时，LVX与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）方向渗移，当接触到所述第一检测线（4）时发生抗原抗体结合反应而被全部截留下来，形成可见的淡红色条带；金标垫上剩余的金标多克隆抗体继续向所述第二检测线（5）、第三检测线（6）方向渗移，当接触到所述第二检测线（5）和第三检测线（6）时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述对照线（7）方向渗移，当接触到所述对照线（7）时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第二检测线（5）、第三检测线（6）没有颜色变化，而第一检测线（4）出现淡红色、对照线（7）出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合X病毒，病毒含量低，田间防治以杀灭蚜虫为主；若待检溶液中含有LVX，检测样品经过所述胶体金结合垫时，LVX与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）方向渗移，当接触到所述第一检测线（4）时发生抗原抗体结合反应而被部分截留下来，形成淡红色条带；剩余的复合物继续往所述第二检测线（5）、第三检测线（6）方向渗移，当接触到所述第二检测线（5）时发生抗原抗体结合反应被全部截留下来，形成淡红色条带；剩余的金标多克隆抗体继续向所述第三检测线（6）和对照线（7）方向渗移，当接触到所述第三检测线（6）时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述对照线（7）方向渗移，当接触到所述对照线（7）时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第三检测线（6）没有颜色变化，而第一检测线（4）和第二检测线（5）出现淡红色、对照线（7）出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合X病毒，田间防治采取杀灭蚜虫并喷施抗病毒药剂；若待检溶液中含有LVX，检测样品经过所述胶体金结合垫时，LVX与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）方向渗移，当接触到所述第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）时分别发生抗原抗体结合反应而被截留下来，第一检测线（4）、第二检测线（5）形成淡红色、而第三检测线（6）形成棕红色条带；剩余的金标多克隆抗体继续向所述对照线（7）方向渗移，当接触到所述对照线（7）时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一检测线（4）、第二检测线（5）出现淡红色、第三检测线（6）和对照线（7）均出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合X病毒，且病毒含量高，田间防治应增加抗病毒药剂的使用量和使用频次，同时杀灭蚜虫；若检溶液中不含LVX，检测样品经过所述胶体金结合垫时，则不能与金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述对照线（7）方向渗移，当接触到所述对照线（7）时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一检测线（4）、第二检测线（5）、第三检测线（6）均没有颜色变化而仅对照线（7）出现棕红色的条带时，则判定被检样品没有感染百合X病毒。