一种重组黑曲霉葡萄糖氧化酶的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种重组黑曲霉葡萄糖氧化酶的制备方法及其应用。将本发明的Agod基因导入里氏木霉Tu6△tku70中构建的重组里氏木霉Tu6△tku70::Agod能够成功地表达重组黑曲霉葡萄糖氧化酶，而且表达量较高，发酵液中的酶活力可达到137U/mL，是目前产葡萄糖氧化酶菌株中摇瓶发酵酶活力的最高水平。将发酵液中的重组黑曲霉葡萄糖氧化酶通过镍柱纯化后测定的酶活力可达到342U/mL，重组黑曲霉葡萄糖氧化酶的比活力为155U/mg蛋白。采用本发明的方法制备的重组黑曲霉葡萄糖氧化酶具有很好的热稳定性和较好的酸碱耐受性，发酵工艺简单，不需转接，原料廉价易得，成本大大降低，可广泛应用于食品医疗领域中。

主权项

核酸分子，是Agod基因或RNA分子，所述Agod基因为如下a)‑f)中任一所述的DNA分子或cDNA分子：a)其编码序列是SEQ ID No.1的第4682‑6520位的DNA分子或cDNA分子；b)其编码序列是SEQ ID No.1的第4733‑6520位的DNA分子或cDNA分子；c)其编码序列是SEQ ID No.2的DNA分子或cDNA分子；d)其编码序列是SEQ ID No.2的第52‑1821位的DNA分子或cDNA分子；e)与a)或b)或c)或d)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且与a)或b)或c)或d)限定的核苷酸序列具有相同功能的cDNA分子或基因组DNA分子；f)在严格条件下与a)或b)或c)或d)限定的核苷酸序列杂交，且与a)或b)或c)或d)具有相同功能的cDNA分子或基因组DNA分子；所述RNA分子为如下g)‑j)中任一所述的RNA分子：g)其编码序列是将SEQ ID No.1的第4682‑6520位中的T均替换为U，其它核苷酸不变得到的RNA分子；h)其编码序列是将SEQ ID No.1的第4733‑6520位中的T均替换为U，其它核苷酸不变得到的RNA分子；i)其编码序列是将SEQ ID No.2中的T均替换为U，其它核苷酸不变得到的RNA分子；j)其编码序列是将SEQ ID No.2的第52‑1821位中的T均替换为U，其它核苷酸不变得到的RNA分子。