一种植酸酶的检测方法

摘要

本发明属于生物检测领域，涉及一种用于检测样品中植酸酶的方法。主要是利用羧基-氨基化学偶联法偶联分散型纳米微球和植酸分子，在溶剂相中形成植酸酶与植酸结合的表面快速反应体系，产物正磷酸直接进入溶剂相，而未反应的肌醇衍生物仍滞留于固相微球。通过低温和高速离心去除微球，在酸性条件下在溶剂相中加入显色剂生成蓝色复合物，在波长700nm比色测定。该方法在实现植酸酶活力快速测定的同时，使未反应的肌醇衍生物仍滞留于固相微球，避免了常规方法中未完全反应的植酸分子与显色剂反应所造成的背景值干扰，使得痕量测定成为可能。适用于特定环境样品如土壤、水体和根际残留物中的痕量植酸酶样品测定。

主权项

一种植酸酶的检测方法，其特征是利用羧基‑氨基化学偶联法偶联分散型纳米微球和植酸分子，在溶剂相中形成植酸酶与植酸结合的表面快速反应体系，产物正磷酸直接进入溶剂相，而未反应的肌醇衍生物仍滞留于固相微球，通过低温和高速离心去除微球，在酸性条件下在溶剂相中加入显色剂生成蓝色复合物，在波长700nm比色测定，通过制定的标准曲线，最终换算成植酸酶活力单位；其中所述的分散型纳米微球为单分散羧基化聚苯乙烯微球，粒径<50nm，表面载基团为羧基；其中，所述的利用羧基‑氨基化学偶联法偶联分散型纳米微球和植酸分子是将单分散羧基化聚苯乙烯微球用碳化二亚胺活化20～40min，然后加入N‑羟基硫代琥珀酰亚胺反应15min使微球形成稳定的活泼酯中间体，再加入植酸钠30℃温育1‑2小时，洗涤后收集偶联植酸分子的纳米微球；其中所述的单分散羧基化聚苯乙烯微球、碳化二亚胺、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺以及植酸钠的用量为1g：0.01～0.1mol：0.005～0.1mol：0.001～0.01mol。