一种降低野生型人鼠杂交瘤A_L细胞自发突变背景的方法

摘要

本发明公开了一种降低野生型人鼠杂交瘤A_L细胞自发突变背景的方法，包括野生型细胞收集；与荧光抗体的结合；制备上样悬液；细胞分选；保存。该方法操作简单，从收集细胞、与特异性荧光蛋白结合到分选，整个过程仅需4-5小时，并可同时获得能连续培养的未突变（CD59⁺）细胞和突变（CD59^-）细胞，这在很大程度上提高CD59基因突变检测的效率。通过该方法，A_L细胞的自发突变率可降至10⁵存活细胞中约有30个突变细胞，较Panning后获得的自发突变下降2倍，有效提高了该突变检测系统的实验灵敏性。

主权项

一种降低野生型人鼠杂交瘤A_L细胞自发突变背景的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)野生型细胞收集收取培养至对数生长期的细胞，酶解消化，悬浮于F12完全培养基中，清洗后制成浓度为±10⁶细胞/100μl的单细胞悬液；(2)与荧光抗体的结合加100μl预冷的流式细胞缓冲液重悬细胞后，按配比浓度加入荧光标记的CD59特异性抗体，4℃避光反应30～60分钟后，用预冷的FACS Buffer清洗离心，去除未结合的抗体；(3)制备上样悬液重悬细胞于预冷的流式细胞缓冲液后，送入流式细胞分选仪待测；(4)细胞分选使用流式细胞分选仪进行分选；(5)保存将分选获得的未突变细胞扩增，液氮保存；所述细胞包括A_L细胞、由该细胞发展的各种缺陷型细胞以及构建的细胞系。