一种捕获核酸片段的方法

摘要

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，提供了一种捕获核酸片段的方法。所述方法包括以下步骤：A.以含待捕获核酸片段的核酸分子为原料，利用生物素标记的扩增引物或接头元件制备捕获探针；B.使捕获探针与待捕获核酸片段库杂交，利用含链霉亲和素或亲和素标记的固相载体捕获所述待捕获核酸片段。本发明的捕获核酸片段的方法能够避免因为捕获探针的均一性差而导致的捕获效果差的现象的发生，并降低捕获核酸片段的成本。

主权项

一种捕获核酸片段的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1).以基因组DNA为模板，利用用于特异性扩增待捕获核酸片段的引物对进行PCR扩增，得含待捕获核酸片段的核酸分子；(2).以含待捕获核酸片段的核酸分子为原料，利用生物素标记的扩增引物或生物素标记的接头元件制备生物素标记的捕获探针；(3).使生物素标记的捕获探针与待捕获核酸片段库杂交；所述步骤(3)包括以下步骤：①.利用亲和素标记的固相载体捕获步骤(2)中的生物素标记的捕获探针，得固定在固相载体上的捕获探针；②.使固定在固相载体上的捕获探针与待捕获核酸片段库杂交得第一次杂交产物，分离纯化第一次杂交产物得含固相载体的第一产物；③.使步骤(3)中步骤②得到的产物变性，得第一次捕获产物；所述杂交是在周期性振动中进行的；所述用于特异性扩增待捕获核酸片段的引物对为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18、以及SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；所述的杂交的时间为18h，杂交的温度为65℃，捕获探针的量与待捕获核酸片段库的量的比例分别为2：1、1：1、1：2、1：5或1：10。