一种获得高纯高效的藻毒素降解酶的生物合成方法

摘要

本发明公开了一种获得高纯高效的藻毒素降解酶（MlrA）的生物合成方法，属于生物技术应用或环境保护领域。本发明方法包括如下步骤：将如SEQ ID NO.1所示的序列构建到pMAL-C2X上得到pMAL-MlrA；将pMAL-MlrA转化到大肠杆菌TB1中得到MlrA的表达菌；将MlrA的表达菌用IPTG诱导表达，收集诱导表达后的菌体，破碎后利用麦芽糖结合蛋白（MBP）标签纯化得到高纯高效的藻毒素降解酶。本发明通过优化表达载体和表达条件，获得的MBP-MlrA纯度达到90%以上，切除MBP标签后的MlrA纯度可以达到98%以上；通过本发明得到的藻毒素降解酶降解范围广，降解效率高。

主权项

一种获得高纯高效的藻毒素降解酶的生物合成方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将如SEQ ID NO.1所示的MlrA序列构建到原核表达载体pMAL‑C2X上得到表达MlrA的载体pMAL‑MlrA；(2)将pMAL‑MlrA转化到大肠杆菌TB1中得到MlrA的表达菌；(3)将MlrA的表达菌用IPTG诱导表达，收集诱导表达后的菌体，破碎后利用pMAL‑C2X上的融合蛋白表达标签纯化得到高纯高效的藻毒素降解酶；步骤(3)中所述的纯化的方法包括如下步骤：用二次蒸馏水、0.5M的NaOH溶液、柱平衡缓冲液洗涤MBP柱，平衡纯化柱；将收集的诱导表达后的菌体用柱平衡缓冲液重悬，超声破碎，离心取上清，与平衡后的MBP树脂结合；将结合的混合液倒入到空柱中，先用柱平衡缓冲液冲洗使杂蛋白从树脂上脱落下来，再用洗脱缓冲液洗脱收集目的蛋白得到纯化的藻毒素降解酶MlrA；其中，柱平衡缓冲液组分为：36mM KH₂PO₄，18mM K₂HPO₄，200mM KCl；洗脱缓冲液组分为：0.36g麦芽糖，柱平衡缓冲液100mL。