快速检测TTX的磁性免疫层析方法及检测试纸条的制备

摘要

本发明涉及一种快速检测TTX的磁性免疫层析方法及检测试纸条的制备，属于河豚毒素检测技术领域。将样品垫、经抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫、预包被有TTX-BSA检测抗原的检测线T和山羊抗小鼠IgG的控制线C的层析膜、吸水垫依次相互交错约1mm粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜，组建成一种可快速检测TTX的磁性免疫层析试纸条；通过层析作用捕获免疫磁珠，依据样品层析后形成肉眼可见的1～2条显色条带，实现TTX的快速定性检测；将所构建的磁性免疫试纸条通过磁性分析仪进行检测，依据样品层析后形成的检测线和控制线的磁信号检测值可实现TTX的定量检测。

主权项

一种快速检测TTX的磁性免疫层析试纸条，其特征在于：将样品垫、经抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫、预包被有TTX‑BSA检测抗原的检测线T和山羊抗小鼠IgG的控制线C的层析膜、吸水垫依次相互交错约1mm粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜，根据要求宽度切割即得到快速检测TTX的磁性免疫层析试纸条；其中，抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠称之为免疫磁珠；(1)免疫磁珠的制备方法是选用直径为50‑200nm的磁珠，使用EDC和NHS共价交联的方式将抗TTX特异性鼠系单克隆抗体标记在磁珠上；(2)层析膜的包被方法是：用自动喷膜仪，以0.8μL/cm的速度，将TTX‑BSA、山羊抗小鼠IgG溶液分别喷点在层析膜的检测线T和控制线C处，喷点时线与线间的间隔距离为0.5‑1.0cm；包被后的层析膜于37℃的干燥箱中烘干4‑6小时，置于干燥器中保存备用；检测时通过层析作用捕获免疫磁珠，样品层析后形成肉眼可见的1～2条显色条带；其中，TTX‑BSA检测抗原制备方法是：将TTX与牛血清白蛋白(BSA)按1∶5(w/w)混合，加入4％甲醛溶液作为偶联剂，于30℃下旋转反应3d，反应完成后，将混合物取出后用商业化的PD‑10脱盐柱，脱盐介质为pH7.4的10mM PBS；所述TTX是指河豚毒素。