胰高血糖素样肽-2聚乙二醇结合物及其制备方法和用途

摘要

本发明提供了一种胰高血糖素样肽-2聚乙二醇结合物，所述的胰高血糖素样肽-2聚乙二醇结合物是聚乙二醇修饰胰高血糖素样肽-2得到的，其中每个胰高血糖素样肽-2上共价结合1个聚乙二醇分子。本发明还提供了上述胰高血糖素样肽-2聚乙二醇结合物的制备方法和用途。本发明通过对PEG化反应条件的优选，得到一种药效好、半衰期长的胰高血糖素样肽-2聚乙二醇结合物，若用于临床，每周只需用药1-2次，可大大减轻病人的痛苦。同时，本发明提供的重组生产GLP-2的方法简单、安全，大大降低制备胰高血糖素样肽-2聚乙二醇结合物的成本，应用前景良好。

主权项

一种制备胰高血糖素样肽‑2的方法，其特征在于：它包括如下步骤：a、构建包含编码硫氧还蛋白、编码蛋白水解酶识别位点以及编码胰高血糖素样肽‑2基因片段的表达质粒；b，将步骤a制备的表达质粒导入宿主细胞，并进行诱导表达，得到表达产物，分离纯化表达产物，得到硫氧还蛋白‑胰高血糖素样肽‑2融合蛋白；c，用蛋白水解酶水解步骤b得到的融合蛋白，纯化，即得胰高血糖素样肽‑2；其中，所述的步骤a中，表达质粒是pET32a，编码蛋白水解酶识别位点以及编码胰高血糖素样肽‑2基因片段如SEQ ID NO.2所示，其中蛋白水解酶识别位点为肠激酶识别位点；所述步骤b中，宿主细胞是大肠杆菌；所述步骤c中，蛋白水解酶为肠激酶。