一种从轻度污染的细胞液中挽救细胞的方法

摘要

本发明公开了一种从轻度污染的细胞液中挽救细胞的方法。本发明提供的方法包括如下步骤：（1）取轻度污染的细胞活力为40%至80%的细胞液，弃上清，100g离心5s弃上清；加入培养液并吹打，100g离心5s弃上清；加入培养液并吹打，500g离心10s弃上清，得到A体积的细胞沉淀；加入10倍A体积的双抗培养液，静置30s后弃上清；加入10倍A体积的双抗培养液并吹打，3000g离心120s弃上清；加入双抗培养液至总体积为20倍A体积，37℃培养6h；（2）吸弃除贴壁细胞以外的液体，冲洗后加入20倍A体积的双抗培养液,37℃培养12小时；（3）吸弃除贴壁细胞以外的液体，冲洗后加入20倍A体积的所述双抗培养液,然后在CO₂培养箱中37℃培养12小时。此种对轻度污染细胞的处理方法可以恢复细胞活性，完成细胞传代。

主权项

一种从轻度污染的细胞液中挽救细胞的方法，包括如下步骤：(1)取轻度污染的细胞液，吸弃上清，然后100g离心5s，弃上清；加入足以覆盖细胞的培养液并吹打，然后100g离心5s，弃上清；加入足以覆盖细胞的所述培养液并吹打，然后500g离心10s，弃上清，得到细胞沉淀，将细胞沉淀的体积定义为A体积；加入10倍A体积的双抗培养液，静置30s后吸弃上清；加入10倍A体积的所述双抗培养液并吹打，然后3000g离心120s，弃上清；加入足以覆盖细胞的所述双抗培养液并吹打，得到细胞悬液，然后继续加入所述双抗培养液至总体积为20倍A体积，然后在CO2培养箱中37℃培养6h；所述轻度污染的细胞液为细胞活力为40％至80％的细胞液；(2)取完成步骤(1)的培养体系，吸弃除贴壁细胞以外的液体，用双抗PBS缓冲液冲洗3遍，然后用所述双抗培养液冲洗1遍，加入20倍A体积的所述双抗培养液,然后在CO2培养箱中37℃培养12小时；(3)取完成步骤(2)的培养体系，吸弃除贴壁细胞以外的液体，用所述双抗PBS缓冲液冲洗3遍，然后用所述双抗培养液冲洗1遍，加入20倍A体积的所述双抗培养液,然后在CO2培养箱中37℃培养12小时；(4)取完成步骤(3)的培养体系，吸弃上清液，用所述双抗PBS缓冲液冲洗3遍，然后用所述双抗培养液冲洗1遍，用0.05％Trypsin‑EDTA消化，离心弃上清，得到细胞沉淀，将细胞沉淀的体积定义为B体积；加入20倍B体积的所述双抗培养液，然后在CO2培养箱中37℃培养48小时；所述培养液为含体积比为10％的胎牛血清的RPMI‑1640培养基；所述双抗培养液为含100μg/1ml青霉素和100μg/1ml链霉素的所述培养液；所述双抗PBS缓冲液为含100U/1ml青霉素和100μg/1ml链霉素的pH7.4、0.01M的PBS缓冲液；所述细胞液为鼻咽癌细胞株5‑8F的细胞液、鼻咽癌细胞株C666‑1的细胞液或食管鳞癌细胞系TE8的细胞液。