一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法

摘要

本发明公开了一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法，属于植物组织培养技术领域。方法包括：(1)培养基的配制；(2)博落回体细胞胚胎发生；（3）体细胞胚胎萌发与成苗；(4)再生苗的移栽与培养等。本发明以博落回的花丝作为胚状体诱导外植体所建立的组培方法，能够快速、高效、大规模的生产高质量的博落回种苗。

主权项

一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)外植体的取材与消毒：取未开放的博落回花蕾消毒后；将花蕾轻轻拨开，拔取花丝，切除花药，作为外植体，备用；2)胚性愈伤组织诱导培养：将步骤1)消毒的花丝外植体接种到MS+2,4‑D0.5mg/L+6‑BA0.5mg/L培养基上；在温度25±1℃，光照强度1000‑3000Lx，光照时间16～18h/d的条件下进行胚性愈伤诱导培养，培养30～40d后得到胚性愈伤组织；3)体细胞胚胎诱导培养：将步骤2)得到的胚性愈伤组织转接到MS+GA₃0.5mg/L培养基上，在温度25±1℃，光照强度1000‑3000Lx，光照时间16‑18h/d的条件下进行胚状体诱导培养，20天后形成胚状体或芽；4)体细胞胚胎萌发与成苗培养：将步骤3)得到的胚状体或芽转接到MS培养基上，在温度25±1℃，光照强度1000‑3000Lx，光照时间16‑18h/d的条件下培养15～30天形成生根的完整植株；5)再生苗的移栽与培养：将生根苗，移栽到泥炭土：木质泥炭土：椰糠粉：蛭石＝1:1:1:1的炼苗基质中，浇透水，并用塑料小棚罩住小苗，保证棚内湿度不低于80％，在温度25±1℃，光照强度为3000lx下培养，小苗适应培养环境两周后，移除塑料棚，进行正常的水肥管理。