异种骨移植替代材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种异种骨材料的脱脂处理方法，取新鲜的异种骨条放入索氏提取器的抽提筒内，利用石油醚在一定条件下不断回流抽提，直到更换后的石油醚经脱脂后其颜色仍然保持澄清；得到脱脂后的异种骨材料。本发明还公开了一种脱蛋白处理方法，将前述脱脂处理后的异种骨材料放入含胃蛋白酶的脱蛋白处理液中进行浸泡，浸泡时pH值控制在1.5～3，然后用碱液灭活胃蛋白酶，反复冲洗、沥干后即可。本发明还公开了一种异种骨移植替代材料的制备方法，将前述脱脂、脱蛋白处理后的异种骨材料进行冷冻干燥、灭菌处理，即得到异种骨移植替代材料。本发明的方法加工制作简单、成本低，产品具有低抗原性、较好的骨传导性及生物力学性能。

主权项

一种异种骨移植替代材料的制备方法，包括以下步骤：（1）采用脱脂处理方法对异种骨材料先进行脱脂处理；所述脱脂处理方法是采用石油醚索氏抽提法，所述脱脂处理方法具体包括以下步骤：取新鲜的异种骨条并用滤纸包好，将包含异种骨条的滤纸筒放入索氏提取器的抽提筒内，连接接收瓶，由索氏提取器的冷凝管上端加入石油醚，石油醚的添加量按每50g异种骨条添加280ml～320ml；然后于60℃～70℃水浴上加热，使石油醚不断回流抽提，回流抽提过程中至少更换一次接收瓶，并在更换接收瓶时再次注入前述体积量的新的石油醚，直到更换后的石油醚经反复回流抽提脱脂后其颜色仍然保持澄清；停止抽提脱脂，取出异种骨条进行反复冲洗，透析，沥干后得到脱脂后的异种骨材料；所述新鲜的异种骨条是指宰杀6h内、且去除掉周围软组织、骨膜及骨髓的牛胫骨上端松质骨；更换接收瓶的间隔时间控制在12h～14h，整个抽提脱脂的处理时间控制在48h以上；（2）采用脱蛋白处理方法对经过上述步骤（1）脱脂处理后的异种骨材料进行脱蛋白处理；脱蛋白处理方法包括以下步骤：将脱脂处理后的异种骨材料放入含胃蛋白酶的脱蛋白处理液中进行浸泡，浸泡过程中所述脱蛋白处理液的pH值控制在1.5～3，浸泡处理完成后用碱液将脱蛋白处理液的pH值上调到8以上，以灭活其中的胃蛋白酶，然后反复冲洗浸泡后的异种骨材料，沥干后得到脱蛋白后的异种骨材料；所述脱蛋白处理液主要由胃蛋白酶和磷酸盐缓冲液配制而成，所述胃蛋白酶的用量为2500U/g～4000U/g；所述磷酸盐缓冲液主要由磷酸溶液和磷酸氢二钠溶液按照（2.6～2.7）∶1的体积比混合而成；所述浸泡处理时脱蛋白处理液的用量按每克异种骨材料添加18ml～22ml计，浸泡处理的时间不少于8h，浸泡处理在室温下进行；（3）将经过步骤（2）脱蛋白处理后的异种骨材料进行冷冻干燥、灭菌处理，得到异种骨移植替代材料；所述冷冻干燥是指将步骤（2）后的骨材料放入‑72℃～‑80℃的冻干机内冻结干燥24h～48h；所述灭菌处理是指将冷冻干燥后的骨材料用塑料袋包装封口后放入环氧乙烷灭菌器内灭菌，环氧乙烷的质量浓度控制在480mg/L～520mg/L，灭菌温度控制在38℃～42℃，灭菌湿度为45%～55%，灭菌作用时间为3h～4h，消毒强度在1500 mg/h·L～2000 mg/h·L；所述反复冲洗和透析均采用蒸馏水进行，所述反复冲洗和透析的时间控制在24h以上。