测定去抑制后酶活性的方法和设备

摘要

本发明涉及一种测定样品中酶活性的方法，该样品含有至少一种酶和至少一种与所述酶相对应的酶抑制物，测定去抑制后释放的酶活性方法如下：在样品中加入底物，记录至少一种反应产物(酶切产物)浓度随时间的变化，其中所述酶的特异性底物所含的荧光部分在该酶反应中被切断，可检测其荧光(测定参数)，即检测设定的与要检测的酶活性明确相关的波长范围；所述去抑制是通过在样品中浸入结合有抑制物结合基质的刚性载体而实现。本发明还涉及测定样品中酶活性的相应设备。

主权项

一种测定样品中组织蛋白酶B活性的方法，该样品含有至少一种组织蛋白酶B和至少一种与所述组织蛋白酶B相对应的酶抑制物，其中所述组织蛋白酶B的活性通过与所述酶抑制物结合而受到抑制；该方法包括步骤：去除组织蛋白酶B上结合的酶抑制物，从而去抑制，所述去抑制是通过在样品中浸入结合有抑制物结合基质的刚性载体，所述载体上共价结合或吸附有抑制物结合物质，所述刚性载体选自纤维素条带或多孔陶瓷；去抑制后，在样品中加入组织蛋白酶B的底物，记录至少一种反应产物浓度随时间的变化，所述反应产物是组织蛋白酶B与底物反应的产物，其中所述组织蛋白酶B的特异性底物由：寡肽组成，所述肽的C‑端结合于7‑氨基‑4‑三氟甲基香豆素，所述肽的N‑端受保护基团保护，其中所述底物所含的荧光部分在该酶反应中被切断，在500nm或以上的波长范围内检测其荧光。