饲料型四倍体刺槐叶片总RNA的提取方法

摘要

本发明涉及植物分子生物学领域，即一种饲料型四倍体刺槐叶片总RNA的提取方法。特点是：将四倍体刺槐叶片装入离心管磨细，加入冰浴缓冲液和β-巯基乙醇，离心弃上清，加入CTAB提取液和β-巯基乙醇，离心取上清液，加酚和氯仿，混匀离心取上清液，加入乙醇和醋酸钾溶液混匀，冰浴静置弃上清液，乙醇清洗后弃上清液，气干，用ddH₂O溶解RNA沉淀。其有益效果是：叶片直接在离心管里研磨以及利用氯仿只抽提一次，减少了操作时间和材料用量，提取液加入皂土可更好的去除蛋白的干扰，大量的醋酸钾以去除多糖，从而获得高纯度、高产量且完整稳定的RNA，具有操作简便、成本低、普通设备和国产化学试剂即可满足要求等特点，为深入进行饲料型刺槐及同类植物的分子生物学研究提供了条件。

主权项

一种饲料型四倍体刺槐叶片总RNA的提取方法，其特征在于：将四倍体刺槐叶片装入离心管研磨成粉末，加入由pH=8的100mmol／L的Tris‑HCl、pH=8的25mmol／L的EDTA、2.0mol/L的NaCl组成的冰浴缓冲液和β‑巯基乙醇，离心，弃去上清，向离心管中加入由2％的CTAB、0.8％的皂土、pH=8.0的100mmol／L的Tris‑HCl、pH=8.0的25mmol／L的EDTA、1.4mol／L的NaCl、1％的聚乙烯聚吡咯烷酮和0.1％的DEPC组成的CTAB提取液和β‑巯基乙醇混匀，离心，取上清液，加入体积比为1：1的水饱和酚与氯仿，混匀，离心，吸取上清液，加入1／2体积的无水乙醇和l体积的pH=5.8的5mol／L醋酸钾溶液混匀，冰浴静置后离心，弃去上清液，用由7.5份无水乙醇和2.5份DEPC处理过的ddH₂O配制的75％乙醇清洗后进行离心，弃掉上清液，气干，用DEPC处理过的ddH₂O彻底溶解RNA沉淀，其中所述DEPC处理过的ddH₂O是指用0.1份DEPC加入99.9份ddH₂O中漩涡混匀再经高温高压灭菌制得的纯水。