表达禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白重组菌的构建

摘要

本发明涉及一种表达禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白重组菌的构建。本发明通过合成了禽脑脊髓炎VP1基因的引物，构建了带有该基因的高效表达载体的重组菌，实现了禽脑脊髓炎VP1蛋白在大肠杆菌中的高效表达，可溶性蛋白表达量约占菌体总蛋白的60％。该表达产物为胞液中可溶性蛋白，具有天然VP1蛋白的抗原活性，用其制备成的禽脑脊髓炎VP1亚单位疫苗能有效地保护禽类免遭禽脑脊髓炎病毒的攻击。这将为工业化生产禽脑脊髓炎亚单位灭活疫苗奠定了坚实的基础。

主权项

一种表达禽脑脊髓炎VP1蛋白重组菌，其特征在于该重组菌是将含有所述禽脑脊髓炎VP1蛋白基因的核苷酸片段连入克隆载体pMD18‑T，并转入大肠埃希氏菌DH5α，其中禽脑脊髓炎VP1蛋白基因的核苷酸序列如序列1所示；将鉴定正确的阳性质粒，pMD18‑T‑VP1用ECORI和SalI双酶切后，经1.2%琼脂糖凝胶电泳，回收到VP1基因；回收的VP1基因连入pET‑32a，构建成禽脑脊髓炎VP1蛋白基因的表达载体pET‑32a‑VP1，转化表达型大肠杆菌Rossetta，获得可表达禽脑脊髓炎VP1蛋白的基因工程大肠埃希氏菌pET‑32a‑VP1/Rossetta株，该菌株已于2011年12月13日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.5581。