Deficiencia de dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa bifuncional en Tetrahymena y su uso

摘要

Un procedimiento para producir una célula ciliada con actividad de de dihidrofolato reductasa (DHFR) reducida oesencialmente sin actividad de o con actividad de de timidilato sintasa (TS) reducida o esencialmente sin actividadde o con ambas actividades de dihidrofolato reductasa y de timidilato sintasa (DHFR-TS) reducidas o esencialmentesin actividad, que comprende las etapas de: a) transformación de células ciliadas insertando una construcción que contiene un alelo que altera el gen quecodifica la DHFR-TS endógena en al menos uno de los genes DHFR-TS endógenos del macronúcleo del ciliado(MAC). b) inducción de un proceso de mezclado alélico en las células ciliadas transformadas para generar células quetienen la construcción insertada en la mayoría de todos los genes DHFR-TS funcionales del MAC, e c) identificación de las células generadas en la etapa b) por cultivo comparativo con o sin timidina,y el gen DHFR-TS tiene una secuencia de nucleótidos de acuerdo con Sec. ID Nº 1.