基于寡核苷酸链的汞离子荧光检测芯片、制作及使用方法

摘要

本发明涉及一种基于寡核苷酸链的汞离子荧光检测芯片、制作方法及其使用方法。所述的检测芯片由Hg2+能特异性地与富T寡核苷酸链上的T碱基共价结合，介导两条富T寡核苷酸链上的T-T配对形成稳定的分子间T-Hg2+-T结构，从而诱导已经与富T寡核苷酸链杂交的互补链的释放。检测芯片使用时只需要将待测样品添加到芯片上，并保持一段时间，然后利用芯片信号分析系统扫描芯片，并对荧光信号进行分析。通过荧光信号的变化，实现对的Hg2+检测。样品中Hg2+浓度越高，荧光信号减弱的越多。该方法可以检测的Hg2+的浓度范围是1nM-100μM。

主权项

一种汞离子荧光检测芯片的制作方法，其特征在于将合成的富T寡核苷酸链固定在经修饰的玻片上；然后荧光标记的互补链与固定在玻片上的富T寡核苷酸链杂交，形成双链结构，包括以下步骤：（1）化学修饰的富T寡核苷酸链固定在化学修饰的玻片上2‑20 μM 化学修饰的富T寡核苷酸链按1:1体积比加入2×点样缓冲液，通过以接触式Cartesian microarray制作系统点阵于化学修饰的载玻片表面；点样完毕，将玻片置于70%湿度，室温条件下48～72 h进行固定；分别用0.2％ SDS、去离子水洗2次，每次2 min，然后用醛基封闭液封闭15 min；再依次用0.2％ SDS、去离子水各洗2次，每次2 min，吹干；（2）互补链与富T寡核苷酸链的杂交标记了荧光基团的互补链用杂交液稀释成1‑10 μM，将稀释好的互补链溶液加在芯片的斑点处，盖上盖玻片；芯片置于25℃湿盒中，12‑16h后用10 mM MOPS, 100 mM NaNO3, pH 7.2洗5‑10 min，吹干；所述的化学修饰的富T寡核苷酸链的序列为5’‑NH2‑C12‑TTTTTTTTTTTTTT‑3’；所述的互补链的序列为5’‑ Cy5‑AAAAAAAAAAAAAA‑3’。