用于敲除链霉菌基因的载体及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了用于敲除链霉菌基因的载体及其构建方法与应用。该重组载体是将葡聚糖酶基因插入pKC1139的ClaⅠ位点得到的重组DNA。在实际应用中，可在该重组载体的多克隆位点插入用于敲除链霉菌目的基因的DNA片段后得到链霉菌目的基因敲除载体，将该链霉菌目的基因敲除载体导入待敲除所述目的基因的链霉菌后筛选硫链丝菌素抗性的转化子，对硫链丝菌素抗性的转化子再进行纤维素降解筛选，具体可将硫链丝菌素抗性的转化子接入纤维素筛选平板上再进行刚果红染色直接观察纤维素的降解情况即可获得同源双交换转化子。这样可以避免抗生素抗性假阳性引起的未完全敲除基因的现象。同时可以避免大量转化子PCR验证。可用于任何不产葡聚糖酶菌株的基因敲除双交换转化子的筛选中。

主权项

构建重组载体的方法，是将葡聚糖酶基因插入pKC1139的ClaⅠ位点，得到的重组DNA即为所述重组载体。