一种白酒酿造微生物的高质量DNA提取方法

摘要

本发明涉及一种白酒酿造微生物高质量DNA提取方法。其特征在于：⑴通过对样品进行简单前处理后获得菌体混合物；⑵向混合物中加入DNA提取液、各种酶液、SDS及蛋白酶K等使菌体中的DNA充分释放；⑶加入酚：氯仿：异戊醇及氯仿：异戊醇抽提除去杂蛋白以纯化DNA；⑷异丙醇在低温下沉淀DNA，无水乙醇洗涤，获得高质量的微生物基因组总DNA。本发明具有的优点是所用试剂均为常规试剂，成本低廉，适用范围广、操作简单、条件温和、提取的DNA纯度较高，无需对基因组DNA进行纯化即可进行后续PCR扩增及DGGE分析等优点。

主权项

一种用于白酒酿造微生物群落结构分析的高质量DNA提取方法，其特征在于包括以下步骤：⑴样品预处理称取一定量的大曲，加入30mL PBS 缓冲液（0.0557mol/L Na2HPO4，0.0423mol/L NaH2PO4，pH8.0），涡旋均匀，800r/min离心10min，取上清液，并10000r/min离心10min得固态菌团。⑵DNA提取与检测将上述固态菌团重悬于500μL DNA提取液（0.1M Tris‑HCl，0.1M EDTA，1.5M NaCl，1%CTAB，pH8.0）中，加入10μL纤维素酶（75mg/mL）、蜗牛酶（50mg/mL）和溶菌酶 （40mg/mL），37℃裂解1h；加入10μL 20%SDS，65℃保温1.5h；加入10μL蛋白酶K（5mg/mL）, 60℃水浴摇床1h，4500r/min离心10min，收集上清液；用等体积酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提，4℃ 10000r/min离心10min，收集上清液；用等体积氯仿:异戊醇（24:1）抽提，10000r/min离心10min，取上清液移至干净管中；加入0.6倍体积预冷的异丙醇，‑20 ℃下放置2h以上，4℃ 13000r/min离心20min，去上清液；用预冷的无水乙醇洗涤沉淀2‑3次，真空冷冻干燥。将DNA溶解于100μL TE溶液中，保存于‑20℃冰箱，PCR‑DGGE检测提取高质量DNA的有效性。