利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法，该方法包括以下步骤：抽提PCV 2病毒的DNA，扩增得到PCV 2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段；将扩增片段连接到pCold-SUMO质粒中，构建重组质粒pCold-SUMO-dCap；将重组质粒转化大肠杆菌ArcticExpress Escherichia coli，然后低温诱导表达，表达产物经纯化后得到可溶性的sumo-dCap融合蛋白。本发明的方法能成功克服PCV 2 Cap蛋白在大肠埃希菌中不表达或是表达量极低的难题；本发明方法所表达的Cap蛋白主要以可溶性形式存在、纯化方法简单可行、纯化效果很好、具有很好的免疫学反应原性，可以应用于流行病学诊断方法的建立及疫苗的研究。

主权项

一种利用pCold‑sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）抽提PCV2病毒的DNA；根据PCV 2 ORF2的序列设计引物，扩增得到PCV2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段；（2）将步骤（1）扩增得到的基因片段连接到pCold‑SUMO质粒中，构建重组质粒pCold‑SUMO‑dCap；（3）将重组质粒pCold‑SUMO‑dCap转化大肠杆菌ArticExpress Escherichia coli，得到重组大肠杆菌Artic Exp.E.coli／pCold‑Sumo‑dCap；然后对重组大肠杆菌Artic Exp.E.coli／pCold‑Sumo‑dCap低温诱导表达，表达产物经纯化后得到可溶性的sumo‑dCap融合蛋白；步骤（1）所述的引物，其序列为：引物P1：5’‑ATCAGGATCCAATGGCATCTTCAACACCCG‑3’；引物P2：5’‑ATCACTGCAGTTAAGGGTTAAGTGGGGGGTCTTT‑3’。