基于引物阵列芯片的DNA测序方法

摘要

本发明涉及一种基于引物阵列芯片的DNA测序方法，其特征在于把一组序列已知的引物固定在芯片上，然后把4张相同的芯片，分别放入4个分别含有荧光标记的四种不同双脱氧核苷酸的反应体系中，与待测DNA进行退火杂交，使引物延伸1个核苷酸，检测芯片的荧光信号得到一组由引物末端序列和延伸核苷酸组成的短序列，将彼此重叠的短序列拼接成待测DNA的完整序列。

主权项

一种基于引物阵列芯片的DNA测序方法，其特征在于把一组序列已知的引物固定在芯片上，然后把4张相同的芯片，分别放入4个分别含有荧光标记的四种不同双脱氧核苷酸的反应体系中，与待测DNA进行退火杂交，使引物延伸1个核苷酸，检测芯片的荧光信号得到一组由引物末端序列和延伸核苷酸组成的短序列，将彼此重叠的短序列拼接成待测DNA的完整序列，包括如下步骤：步骤1)将一组序列已知的引物的5’端固定在基片上预设的位置排列成引物阵列芯片；步骤2)把4张相同的芯片，分别放入4个分别含有荧光标记的四种不同双脱氧核苷酸ddATP，ddCTP，ddGTP和ddUTP的反应体系中，体系中还含有PCR缓冲液、DNA聚合酶和待测的双链DNA或单链DNA；步骤3)反应体系在PCR仪、芯片杂交仪或者其它可以改变和控制温度的仪器上，进行模板DNA变性温度、引物与模板DNA结合温度、引物延伸温度的温度变化过程，循环1～10次，使部分与待测DNA能杂交的引物延伸1个荧光标记核苷酸并终止延伸；步骤4)把芯片从反应体系中取出来，冲洗后，检测芯片的各基点的荧光信号，得到一组不同的由引物末端序列和延伸核苷酸组成的短序列，将彼此重叠的短序列拼接成待测DNA的完整序列。