浓缩果汁中耐热耐酸菌的快速纳米PCR检测方法

摘要

本发明涉及一种浓缩果汁中耐热耐酸菌的快速纳米PCR检测方法，其方法是(1)从浓缩果汁中分离耐热嗜酸菌；(2)耐热嗜酸菌全基因组的提取；(3)依赖纳米银的快速PCR体系的配置；(4)快速PCR条件的设定与运行；(5)PCR产物检测。采用本发明检测方法，其总检测时间约为7.5个小时，与传统的培养计数检测法相比在时间上大大缩短。本发明可直接应用于浓缩果汁工业化生产中对耐热嗜酸菌的有效监控，这对提高果汁质量与安全水平、扩大出口贸易产生巨大的直接经济效益，并具有重要的社会意义。

主权项

1.一种浓缩果汁中耐热耐酸菌的快速纳米PCR检测方法，其特征在于：检测浓缩果汁中耐热耐酸菌的方法步骤是：(1).从浓缩果汁中分离耐热耐酸菌；(2).耐热耐酸菌全基因组的提取；(3).依赖纳米银的快速PCR体系的配置；(4).快速PCR条件的设定与运行；(5).PCR产物检测，所述耐热耐酸菌为Alicyclobacillus acidoterrestris，依赖纳米银的快速PCR体系的配置是(体积)：PCR技术扩增的引物序列为：上游序列P1 5′---3′CGAGCAAGTCTGGAGTGAAAGTC下游序列P2 5′---3′GCTGGTAACACAGGTCAAGGGT，从浓缩果汁中分离耐热耐酸菌的方法是：取浓缩果汁100ml用无菌水稀释10倍，稀释果汁于80℃水浴热休克10min，再用冷水冷却至室温后用0.45μm无菌滤膜抽滤，抽滤后滤膜用无菌医用镊子取下放入装25ml液体培养基的小三角瓶中摇床培养6小时后备用，耐热耐酸菌全基因组的提取方法是：用15ml的锥形离心管5000rpm离心10min，弃上清，细菌沉淀中加5％Chelex100 20μl，涡旋振荡混匀，100℃水浴10min，立即冰浴1min，室温12000g/min离心10min，上清作为DNA模板。