一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)转基因香石竹Moonlite基因组DNA的提取；2)转基因香石竹Moonlite外源基因插入位点左边界旁邻序列的扩增和确认；3)转基因香石竹Moonlite定性PCR检测方法的建立和验证；4)转基因香石竹Moonlite定量PCR检测方法的建立和验证。本发明成功建立了适用于转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，并验证该检测方法的特异性和灵敏度，为转基因香石竹的进口检测、监管及环境安全评价提供依据。

主权项

一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)转基因香石竹Moonlite基因组DNA的提取；2)转基因香石竹Moonlite外源基因插入位点左边界旁邻序列的扩增和确认，其三条巢式引物LB 1R/2R/3R序列分别如SEQ ID No 1、SEQ ID No 2和SEQ ID No 3所示，随机引物AD2序列如SEQ ID No 4所示，香石竹基因组定性PCR扩增引物对GenomeC1F/1R序列如SEQ ID No 9和SEQ ID No 10所示；3)转基因香石竹Moonlite的定性PCR检测方法的建立和验证，其Moonlite品系特异性定性引物对LiteC1F/1R序列如SEQ ID No 7和SEQ IDNo 8所示，内标准基因ans特异性定性引物对ANS‑F1/R1序列如SEQ ID No5和SEQ ID No 6所示；4)转基因香石竹Moonlite定量PCR检测方法的建立和验证，其Moonlite品系特异性定量引物对LiteR1F/LiteR1R和探针Lite‑Probe序列分别如SEQID No 13、SEQ ID No 14和SEQ ID No 16所示，内标准基因ans特异性定量引物对ANS‑F2/ANS‑R2序列和探针ANS‑Probe序列如SEQ ID No 11、SEQID No 12和SEQ ID No 15所示。