利用共显性标记鉴定草菇屏优一号单孢菌株的方法

摘要

本发明提供了一种利用共显性标记鉴定草菇屏优一号单孢菌株的方法，该方法包括对已测序的草菇屏优一号2种单孢基因组序列分析、设计2种单孢的共显性标记引物、菌丝培养与收集、基因组DNA的提取、草菇屏优共显性分子标记的检测建立和共显性标记PCR产物的检测；所述共显性标记引物为屏优F5'-CAATCACTCTTCCGAGGCTC-3’，屏优R5'-GGATACGCATGTTAAAGTGG-3'。本发明提供的利用共显性分子标记鉴定草菇屏优一号单孢菌株的方法，解决了草菇单孢菌株鉴定的问题，具有灵敏度高、检测时间短、检测结果可靠、容易判断、重复性好等优点。

主权项

一种利用共显性标记鉴定草菇屏优一号单孢菌株的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）共显性标记引物的设计：对已测序的2种可配对的草菇屏优一号单孢菌株的基因组序列进行同源比较，找到同源结构变异位点区域，然后应用引物设计软件设计获得2种可配对的草菇屏优一号单孢菌株的共显性标记引物，屏优F及屏优R，其中，屏优F 5'‑CAATCACTCTTCCGAGGCTC‑3’，屏优R 5'‑GGATACGCATGTTAAAGTGG‑3'；（2）模板DNA的提取：获取2种草菇屏优一号单孢菌株，提取DNA；（3）共显性标记PCR分子标记的检测建立：共显性标记PCR扩增体系为10×PCR buffer 3.0 μl，2.5 m mol/L dNTP 1.5 μl，5 U/ul Taq DNA Polymerase 0.3 μl，10μmol/L的屏优F及屏优R引物各1 μl，80ng～200ng/μl模板DNA 1μl，ddH2O 22.2 μl；共显性标记PCR的反应条件为94℃ 1min；94℃ 45second，60℃ 45second，72℃ 1min，30个循环；72℃ 5min；（4）共显性标记PCR产物的检测结果：根据电泳检测的DNA图谱，若扩增出分子量为500bp的特异DNA条带标记为草菇屏优一号第1种单孢菌株，若扩增出分子量为1000bp的特异DNA条带标记为草菇屏优一号第2种单孢菌株；只有草菇屏优一号第1种单孢菌株与第2种单孢菌株之间才能配对出菇，草菇屏优一号第1种单孢菌株或第2种单孢菌株自身之间不能配对出菇。