一种用于卷烟接装纸生物学评价的中性红细胞毒性试验方法

摘要

本发明涉及一种用于卷烟接装纸生物学评价的中性红细胞毒性试验方法，属烟草技术领域。具体方法如下：采用人工唾液作为接装纸浸提液；量取一定面积接装纸，剪成1cm×6cm条状，置于具有磨口塞的50～250mL锥形瓶中备用；按照装纸面积/浸提液比例为24～36cm2/mL向锥形瓶中注入浸提液，盖好塞子；将该锥形瓶置于37±1℃的水浴震荡器中震荡浸提5～180min，制备样品原液；并进行中性红细胞毒性试验；每mL培养液中样品原液剂量依次为1、5、10、25、50、100、200、300、400、500mg；根据中性红细胞毒性试验结果评价接装纸的安全性。本发明的优点在于：有效模拟接装纸与口腔接触的实际状况制备样品，用于中性红细胞毒性试验的样品原液剂量范围合适，方法实用、简便。

主权项

一种用于卷烟接装纸生物学评价的中性红细胞毒性试验方法，其特征在于用于卷烟接装纸生物学评价的中性红细胞毒性试验方法的具体步骤如下：a.采用医疗器械生物学评价研究中常用的人工唾液作为卷烟接装纸的浸提液；b.量取一定面积的卷烟接装纸，剪成1cm×6cm的条状，置于具有磨口塞的50～250mL锥形瓶中备用；c.按照接装纸面积/浸提液比例为24～36cm2/mL向装有接装纸的锥形瓶中注入浸提液，接装纸全部浸入后盖好塞子；d.模拟实际暴露条件，设置浸提温度为37±1℃；e.将该锥形瓶置于37±1℃的水浴震荡器中震荡浸提5～180min，得到样品原液；f.将e步骤得到的样品原液进行中性红细胞毒性试验，即：将生长良好的中国仓鼠卵巢细胞系接种于96孔细胞培养板中，每孔1×104个细胞，置于条件设置为37℃，5％CO2培养箱中孵育24h；弃掉培养板中的培养液，加入不同剂量的样品原液，每mL培养基中受试样品原液的剂量依次为1、5、10、25、50、100、200、300、500mg，继续孵育24h，每一组剂量做6孔平行；弃掉培养板中的溶液，按100μg/mL加入中性红溶液，每孔200μL，置于培养箱中孵育3h；弃掉培养板中的溶液，加入1％(v/v)甲醛溶液，每孔200μL，固定1～2min；弃掉甲醛溶液，加入1％酸性乙醇溶液(v/v)，酸性乙醇溶液为冰醋酸∶无水乙醇∶水＝1∶50∶49，每孔200μL，置于微板振荡器内震荡10min；在酶标仪上测定540nm波长的每孔吸收值，试验重复两次；g.根据中性红细胞毒性试验结果评价卷烟接装纸的安全性。