一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种的培养方法

摘要

本发明是一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种的培养方法。其特征是使用马铃薯、蔗糖、琼脂、酒石酸铵、MgSO 4、KH 2PO 4水等原料按照一定比例配制菌种培养基和液体菌种培养基，培养暗褐网柄牛肝菌子实体离体部分制备菌种，使用液体培养基按照液体培养方法进行菌丝体的发酵培养。本发明中，所提供的培养基特别适合菌种制备及菌丝体的发酵培养。利用该培养方法，可快速进行暗褐网柄牛肝菌菌丝体的发酵培养。

主权项

一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养方法，其特征在于按以下步骤进行：a、用母种培养基培养暗褐网柄牛肝菌子实体组织块制备母种，母种培养基的制备由下述原料及方法配制而成：马钤薯        150～200g蔗糖          15～20g酒石酸铵      1～2gMgSO4         1～2gKH2PO4        1～2g琼脂          15～20g水            1000mlpH            6.0方法：a1)将新鲜马钤薯洗净，去皮，称量，然后切成薄片，放入大烧杯中，加入定量的水，煮沸20分钟过滤取滤液，加入蔗糖、琼脂、酒石酸铵、MgSO4、KH2PO4，煮沸至琼脂完全溶化，pH值6.0，得母种培养基；将培养基分装于三角瓶中，120℃灭菌30分钟，待冷却后在超净工作台中倒入培养皿中即可使用；a2)在超净工作台中无菌操作，用解剖刀分离子实体组织块，置于有母种培养基的培养皿中培养菌丝体生长并扩繁；即采集野生的暗褐网柄牛肝菌子实体，去掉子实体表面的泥沙，先用清水冲洗净，晾干后用75％酒精溶液消毒子实体表面，在超净工作台中，将子实体一掰为二，用解剖刀取菌柄与菌盖交界的中间部位2‑3mm的菌肉组织块放于倒有母种培养基的培养皿中，置于28℃的培养箱中培养，培养30天，菌丝体长满培养皿，得母种；b、用液体培养基发酵培养液体菌种，液体培养基的原料组成如下：马钤薯        150～200g蔗糖          15～20g酒石酸铵      1～2gMgSO4         1～2gKH2PO4        1～2g水            1000mlpH            6.0方法：b1)将新鲜马钤薯洗净，去皮，称量，然后切成薄片，放入大烧杯中，加入定量的水，煮沸20分钟过滤取滤液，在滤液加入蔗糖、酒石酸铵、MgSO4、KH2PO4，混匀，pH值6.0，得液体培养基；将配制好的液体培养基分装于三角瓶中，每瓶300ml，120℃灭菌30分钟，待冷却后备用；b2)将在上述步骤a3中获得的母种转管活化后，将菌丝体连同培养基切成2mm～4mm的碎菌块接种于步骤b1中瓶装的培养基中，在28℃，125r/min回旋式摇床中振荡培养，培养8天得到液体菌种。