一种溴过氧化物酶的分离提取方法

摘要

本发明涉及一种溴过氧化物酶的分离提取方法，其以珊瑚藻为原料，分离纯化得到具有较高活性的溴过氧化物酶。该酶的金属配位基团为矾，表观分子量接近64000，pH在5-9范围内具有很好活性，25-70℃的温度范围内活性稳定，该酶可将单氯双甲酮(monochlorodimedone)溴化，作为一种具有卤化功能的过氧化物酶具有良好的应用前景。

主权项

一种溴过氧化物酶的分离提取方法，其特征在于：以珊瑚藻为原料，分离纯化得到溴过氧化物酶；具体操作过程如下，1)将新鲜珊瑚藻洗净，加入珊瑚藻重量1/5～1/15的含1‑100mM H2O2的pH4‑9磷酸盐缓冲液在冰水浴下研磨提取；2)于0‑10℃、3000～8000rpm离心10～50分钟，取上清液；3)上清液中加入硫酸铵制成40～80％硫酸铵溶液，沉淀后，离心取沉淀物，用pH4‑9 Tris‑Cl缓冲液进行透析10～48小时，得到溴过氧化物酶的粗酶液；透析膜截留分子量为14000；4)所述粗酶液采用阴离子交换树脂及琼脂糖树脂进一步纯化，具体为，①粗酶液上阴离子交换柱层析分离，用NaCl浓度从0.1～0.8M线性梯度洗脱，得到活性组分；粗酶液与洗脱液的体积比为1∶20～40；收集活性组分并测定蛋白含量及酶活，②将离子交换层析所得活性组分冷冻干燥浓缩后上琼脂糖凝胶柱，用0.02M～0.08M pH4‑9的Tris‑HCl缓冲液洗脱分离，得到溴过氧化物酶。