一种1-氨基乙内酰脲人工抗原的制备方法

摘要

一种1-氨基乙内酰脲人工抗原的制备方法，属于生物化工技术领域。本发明以1-氨基乙内酰脲为原料，在搅拌下与对醛基苯甲酸反应，合成半抗原1-氨基乙内酰脲缩对醛基苯甲酸(CPAHD)，再采用碳二亚胺法将半抗原上的羧基与牛血清蛋白(BSA)上的氨基进行偶联，制备人工抗原。本发明合成了1-氨基乙内酰脲的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了方便的途径，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

一种呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲人工抗原的制备方法，其特征是以1-氨基乙内酰脲为原料，在搅拌下与对醛基苯甲酸反应，制备人工半抗原1-氨基乙内酰脲缩对醛基苯甲酸；利用碳二亚胺法将1-氨基乙内酰脲缩对醛基苯甲酸半抗原上的羧基与牛血清蛋白上的氨基进行偶联，制备1-氨基乙内酰脲人工抗原，即1-氨基乙内酰脲-牛血清蛋白；步骤为：1)人工半抗原的制备：在安装有磁力搅拌器装置的烧杯中加入蒸馏水10mL，1mol/L HCl 5mL和对醛基苯甲酸0.01-0.015mol，缓慢滴加N，N-二甲基甲酰胺至对醛基苯甲酸完全溶解，搅拌中加入1-氨基乙内酰脲0.02-0.03mol，1-氨基乙内酰脲的摩尔用量为对醛基苯甲酸摩尔用量的两倍，整个反应温度控制在20-30℃，控制反应2小时；提纯：将反应液过滤得到白色固体，用10mL蒸馏水洗涤然后过滤，重复2-3次，放入真空干燥箱内30℃干燥，得到人工半抗原1-氨基乙内酰脲缩对醛基苯甲酸；反应终点监测：硅胶薄板下端1cm处作一水平线，吸取反应液1μL点于划线处，点样结束，吹干，将薄板放入层析液缸中，层析液是甲醇/氯仿，体积比1∶19，展开层析至5-6cm处，取板，吹干溶剂，将薄板置于紫外分析仪中，在254nm波长观察，在RF＝0.3-0.32可观察到对应的点；2)人工抗原的制备：制备A液：称取0.1mmol半抗原1-氨基乙内酰脲缩对醛基苯甲酸于25mL烧杯中，加入2mL二甲基甲酰胺，搅拌中加入二环己基碳二亚胺0.15mmol，N-羟基琥珀酰亚胺0.15mmol，4℃下搅拌反应过夜，4000rpm离心15min，上清液为A液；制备B液：称取162.5mg的牛血清蛋白溶于10mL的pH9.0硼酸盐缓冲液中，低温保存，此液为B液；在低温搅拌下，将A液缓慢逐滴加入B液中，4℃条件下搅拌反应4h，即得到人工抗原混合液；将人工抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.05M的碳酸氢钠溶液和2×2L的去离子水透析4-6天，透析完成后4000rpm离心15min，最后使用冻干法将上清液制成粉末，即得到人工抗原1-氨基乙内酰脲-牛血清蛋白。