植物悬浮培养物高效转化和再生的方法

摘要

本发明提供了通过农杆菌(Agrobacterium)介导的将T-DNA接合到悬浮培养的细胞或愈伤组织的高效植物转化方法。本文描述的方法使用膜或过滤介质(filter)作为多孔固相支持物，用于T-DNA供体和受体的共培养。

主权项

一种生产转基因棉花植物的方法，所述方法包括：a)提供原胚棉花细胞；b)在液体培养基中培养所述原胚细胞以产生细胞悬浮培养物；c)提供携带包含外源基因和选择标记的载体的经预诱导的根癌农杆菌培养物，所述农杆菌能将所述外源基因和选择标记稳定转移进植物细胞的基因组中，其中所述对根癌农杆菌的预诱导是毒力预诱导；d)将所述细胞悬浮培养物的一部分与所述农杆菌培养物的一部分混合；e)在持续光照的条件下，将所述细胞悬浮培养物与所述农杆菌培养物的混合物在与共培养培养基接触的多孔固相支持物上共培养1-5天，由此产生其中一些细胞用所述外源基因和选择标记转化的细胞群，其中所述共培养培养基不包含来自悬浮培养物的细胞；f)从所述细胞群中选择表达所述外源基因的细胞；g)通过体细胞胚发生将所选择的细胞再生为转基因棉花植物。