| 主权项 |
一种制备促胰岛素肽之方法，其包括一个或多个下列步骤：a)提供包含胺基酸序列HX8EX10 (SEQ ID NO. 6)之第一肽片段，其中X8及X10各自系非对掌性胺基酸之残基，H及E各自视情况包含侧链保护；b)提供包含胺基酸序列TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 8)之第二肽片段，其中以符号X17-18表示之残基系假脯胺酸(pseudoproline)之二肽残基，该序列之该等胺基酸残基视情况包含侧链保护；c)将该第一片段与该第二片段偶合以提供包含胺基酸序列HX8EX10TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 11)之第三肽片段，该序列之该等胺基酸残基视情况包含侧链保护；d)提供包含胺基酸序列QAAKEFIAWLVKX35 (SEQ ID NO. 9)之第四肽片段，其中X35系非对掌性胺基酸之残基，该序列之该等胺基酸残基视情况包含侧链保护；e)将该第四肽片段与精胺酸偶合以提供包含胺基酸序列QAAKEFIAWLVKX35R (SEQ ID NO. 12)之第五肽片段，该序列之该等残基视情况包含侧链保护；及f)将该第五片段与该第三片段偶合以提供包含胺基酸序列HX8EX10TFTSDVX17-18YLEGQAAKEFIAWLVK X35R (SEQ ID NO. 13)之促胰岛素肽，该序列之该等残基视情况包含侧链保护。如请求项1之方法，其包括步骤a)至步骤f)：a)提供包含胺基酸序列HX8EX10 (SEQ ID NO. 6)之第一肽片段，其中X8系对应于Aib之胺基酸残基且X10系对应于甘胺酸之胺基酸残基，且H及E各自视情况包含侧链保护；b)提供包含胺基酸序列TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 8)之第二肽片段，其中以符号X17-18表示之残基系假脯胺酸之二肽残基，该序列之该等胺基酸残基视情况包含侧链保护；c)将该第一片段与该第二片段偶合以提供包含胺基酸序列HX8EX10TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 11)之第三肽片段，该序列之该等胺基酸残基视情况包含侧链保护；d)提供包含胺基酸序列QAAKEFIAWLVKX35 (SEQ ID NO. 9)之第四肽片段，其中X35系对应于Aib之胺基酸残基，该序列之该等胺基酸残基视情况包含侧链保护；e)将该第四肽片段与精胺酸偶合以提供包含胺基酸序列QAAKEFIAWLVKX35R (SEQ ID NO. 12)之第五肽片段，该序列之该等残基视情况包含侧链保护；及f)将该第五片段与该第三片段偶合，继而去除侧链保护基团以提供式HX8EX10TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAW LVKX35R (SEQ. ID No. 5)之促胰岛素肽，其中X8及X35系对应于Aib之胺基酸残基且X10系对应于甘胺酸之胺基酸残基。如请求项1或请求项2之方法，其包括另一步骤：g)去除该等侧链保护基团以提供包含胺基酸序列HX8EX10TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKX35R (SEQ ID NO. 5)之促胰岛素肽及其对等部分，其中位置8、10及35之符号X各自独立地表示视情况空间位阻之非对掌性胺基酸残基。如请求项1之方法，其中X8系对应于甲基丙胺酸之胺基酸残基。如请求项1之方法，其中X10系对应于甘胺酸之胺基酸残基。一种具有胺基酸序列HX8EX10 (SEQ ID NO. 6)之肽片段，其中X8及X10各自系非对掌性胺基酸之残基，H、E、X8及X10及各自视情况包含侧链保护。如请求项6之肽片段，其中X8系对应于Aib之胺基酸残基且X10系对应于甘胺酸之胺基酸残基。如请求项1或2之方法，其中该促胰岛素肽包含胺基酸序列(SEQ ID No. 5)HX8EX10TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKX35R其中位置8、10及35之符号X各自独立地表示视情况空间位阻之非对掌性胺基酸残基；且其中一个或多个胺基酸残基视情况包含侧链保护。如请求项1或2之方法，其中X8及X35中至少一个系Aib残基。如请求项1或2之方法，其中X10系甘胺酸残基。如请求项1或请求项2之方法，其中X17-18具有下式：@sIMGTIF!d10005.TIF@eIMG!其中Φ代表任一胺基酸残基视情况包含侧链保护，R1及R2各自独立地为一个适合二价链接部分。如请求项11之方法，其中Φ代表Ser残基视情况包含侧链保护。如请求项11之方法，其中R2系-CH2-。如请求项11之方法，其中R1系@sIMGTIF!d10006.TIF@eIMG!其中R3及R4各自独立地为选自H或具有1至6个碳原子之烷基之单价部分；或R3及R4亦可为一个具有3至6个碳原子之环结构之共同成员。如请求项14之方法，其中R3及R4各自为甲基。一种包含胺基酸序列TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 8)之肽或其对等部分，其中以符号X17-18表示之残基系假脯胺酸之二肽残基；该等胺基酸残基视情况包含侧链保护。如请求项1或2之方法，其中X35系甲基丙胺酸之胺基酸残基。如请求项1或2之方法，其中该促胰岛素肽具有胺基酸序列(SEQ. ID No. 4)HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR如请求项18之方法，其中该促胰岛素肽具有胺基酸序列(SEQ. ID No. 4)HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR其在C-端醯胺化。 |
