一种从纤细席藻中提取多糖的方法

摘要

本发明公开了一种从纤细席藻中提取多糖的方法，首先将硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙、柠檬酸、柠檬酸铁铵、乙二胺四乙酸二钠盐、碳酸钠，微量元素溶液按比例配制成培养液；然后将纤细席藻置于培养液中培养并制取纤细席藻粉，最后从纤细席藻多糖粉中提取多糖并将所得多糖纯化、收获与干燥。本发明方法易行、操作方便、安全可靠、产量高、产品质量好、且所用设备简单适用于工业化规模生产。

主权项

一种从纤细席藻中提取多糖的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)培养液的配制：按每升水加入硝酸钠0.8～2.5g、磷酸氢二钾0.02～0.05g、硫酸镁0.06～0.09g、氯化钙0.02～0.05g、柠檬酸0.004～0.008g、柠檬酸铁铵0.004～0.008g、乙二胺四乙酸二钠盐0.001～0.003g、碳酸钠0.01～0.04g，微量元素溶液0.5～2ml配制成培养液，其中微量元素溶液为按每100ml蒸馏水中加入硼酸270～300mg、四水氯化锰170～200mg、七水硫酸锌18～25mg、二水钼酸钠15～30mg、五水硫酸铜6～10mg，完全溶解后搅匀即制得培养液；(2)纤细席藻的培养：首先是一级培养，将纤细席藻种置于培养液中静止培养或通气培养，调节气流在1.5～3.5L.min-1，光强控制在65～85μE.m-2.s-1，温度控制在22～35℃，培养5～10天后转入到二级培养；其次是二级培养，将一级培养所得的培养物接入到新的培养液中通气培养，调节气流在2.5～5L.min-1，无菌处理，光强控制在75～95μE.m-2.s-1，温度控制在22～35℃，培养5～10天后，转入到三级培养；第三是三级培养，将二级培养所得的培养物接入到新的培养液中，通气培养，调节气流在3～6L.min-1，无菌处理，光强控制在70～100μE.m-2.s-1，温度控制在22～35℃，培养5～10天后，所得藻种为继续培养的接种种源；继续培养首先是小循环培养池培养，采用三级培养后所得的藻种，接入小循环培养池，控制温度在22～35℃，利用自然光进行光照，控制光照强度在120～180μE.m-2.s-1，搅动培养基；其次是大循环培养池培养，将小循环培养池中培养4～7天的纤细席藻转接到大循环培养池中培养，将大循环培养池中控制温度在22～35℃，利用自然光进行光照，控制光照强度在120～180μE.m-2.s-1培养10～20天后的纤细席藻筛选收得纤细席藻藻浆；(3)纤细席藻粉的制备：将纤细席藻藻浆离心获得纤细席藻藻泥，然后纤细席藻藻泥经浓缩、脱水、干燥、粉碎后得到纤细席藻粉；(4)纤细席藻多糖的抽提：向纤细席藻粉中加入7～10倍重量的蒸馏水，搅匀，然后在70～90℃下，搅拌抽提3～5小时，在3000～6000rpm条件下离心10～15min，收集上清液，向上清液中加入等体积的氯仿正丁醇溶液，振荡20～30min，3000～6000rpm离心10～15min，收集上层溶液，加入3～5倍体积的预先冷冻到0～4℃的无水乙醇，摇匀，静置10～20min，析出的白色絮状沉淀物即为纤细席藻多糖，3000～6000rpm离心5～10min收集多糖；(5)纯化、收获与干燥：首先是纯化，将上述所得多糖溶于4～6倍蒸馏水中，用10～15倍0～4℃冷的无水乙醇洗涤；其次是收获，将纯化后的溶液以8000～10000rpm离心5～10min，收集多糖沉淀物；第三是干燥，将收集到的多糖沉淀物在-60～-110℃下冷冻干燥，得多糖产品。