水产品中七种合成抗菌剂残留量的检测方法

摘要

本测定方法是利用高效液相色谱法同时测定水产品中多种合成抗菌剂残留，主要包括：磺胺嘧啶(sulfadiazine、SD)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine、SMR)、磺胺二甲基嘧啶(sulfadimidine、SDD)、磺胺二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine、SDM)、呋喃唑酮(furazolidone、FZD)、噁喹酸(oxolinic acid、OXA)和萘啶酸(nalidixic acid、NAA)等多种合成抗菌剂。水产品样品中多种合成抗菌剂用乙腈提取，经正己烷去脂，浓缩后、中性氧化铝固相萃取柱或C₁₈固相萃取柱净化，用液相色谱仪分析、紫外检测器检测、外标法定量。该方法能够快速、灵敏、准确的测定多种目标化合物，大大降低检测成本和缩短检测时间。

主权项

一种同时检测水产品中磺胺嘧啶(sulfadiazine、SD)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine、SMR)、磺胺二甲基嘧啶(sulfadimidine、SDD)、磺胺二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine、SDM)、呋喃唑酮(furazolidone、FZD)、噁喹酸(oxolinic acid、OXA)和萘啶酸(nalidixic acid、NAA)等多种合成抗菌剂残留量的检测技术，其特征在于包括下列步骤：1、乙腈提取：称取5g样品(精确至0.01g)置于50mL离心管中，加入20mL乙腈，10g无水硫酸钠，涡旋振荡5min，以10000r/min离心10min。所测定的目标物大部分属于酸碱两性化合物，含有氨基、羧基等极性基团，因此目前用于提取这些药物的溶剂主要有二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等。选择乙腈作为提取溶剂主要是因为二氯甲烷以及乙酸乙酯的溶解性较强，会提取出类脂物，浓缩后不容易脱脂。而乙腈对动物蛋白具有良好的变性作用，在能够有效地提取出目标药物的同时，与其它有机溶剂相比，对脂类的溶解度也较小，且在沉淀样品中蛋白质方面要优于甲醇和乙酸乙酯，因此，本实验中采用乙腈作为提取剂。2、中性氧化铝固相萃取柱净化：当测定磺胺类和呋喃唑酮药物时，旋转蒸发瓶中的残渣用乙腈水溶液(95+5)5mL溶解，中性氧化铝固相萃取柱临用前用乙腈水溶液(95+5)10mL预洗并活化。旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱，收集稀释液于150mL旋转蒸发瓶中，再用乙腈水溶液(95+5)5mL清洗旋转蒸发瓶一次，稀释液过柱一并收集于150mL旋转蒸发瓶中。目前磺胺类药物残留检测资料中使用的固相萃取柱主要有碱性氧化铝、中性氧化铝和HLB固相萃取柱。实验过程中我们通过各个目标物回收率的大小以及去除基质干扰的能力来评价这几种固相萃取柱的净化效果。经过对比实验得出：中性氧化铝(Alumina N)固相萃取柱最适合对磺胺类和呋喃唑酮药物的净化。中性氧化铝柱(pH＝7.5)，是强极性吸附剂，表面呈中性，容易保留杂环类，芳香烃和有机胺等富电化合物，比如食品中色素等杂质的去除多用此机制。此种吸附剂保留杂质而不保留或只保留极少量的目标组分，所以上样后即开始收集目标组分。3、C18固相萃取柱净化：当测定噁喹酸和萘啶酸药物时，旋转蒸发瓶中的残渣用5mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液溶解，C18固相萃取柱先后用10mL甲醇和10mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液预洗并活化，弃掉洗涤液。旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱，再用5mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液清洗旋转蒸发瓶一次过柱，弃掉流出液。用10mL0.05mol/L磷酸二氢钠溶液清洗C18柱，弃掉流出液。用10mL甲醇洗脱，将洗脱液收集至150mL旋转蒸发瓶中。C18固相萃取柱是以硅胶作为基质，具有键和密度高、流失少、回收率高等特点4、测定条件：流动相：乙腈+0.08mol/L乙酸，梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：20μL；检测波长：265nm。在此检测条件下，不但很好的实现了7种药物的分离，并且各峰分离度大，峰形尖锐，对称性好。